Souprava pro detekci neutralizačních protilátek proti SARS-CoV-2 (ELISA) od Testsealabs
Stručný popis:
Kazetový test na neutralizační protilátky proti SARS-CoV-2 je rychlý chromatografický imunotest. Tento test je určen pro kvalitativní detekci neutralizačních protilátek proti koronavirovému onemocnění 2019. Lze jej použít se vzorky lidské plné krve, séra nebo plazmy. Test slouží jako pomůcka při hodnocení hladin titrů lidských neutralizačních protilátek proti novému koronaviru.
 Rychlé výsledky: laboratorně přesné během několika minut | Přesnost laboratorní úrovně: Spolehlivý a důvěryhodný |
| Testujte kdekoli: Není nutná návštěva laboratoře | Certifikovaná kvalita: 13485, CE, v souladu s Mdsap |
| Jednoduché a efektivní: Snadné použití, bez problémů | Maximální pohodlí: Pohodlné testování doma |
【PRINCIP】
Souprava pro detekci neutralizačních protilátek proti SARS-CoV-2 je založena na kompetitivní metodologii ELISA.
Použití purifikované vazebné domény receptoru (RBD), proteinu z virového spike (S) proteinu a hostitelské buňky
receptor ACE2, tento test je navržen tak, aby napodoboval neutralizační interakci mezi virem a hostitelem.
Kalibrátory, kontroly kvality a vzorky séra nebo plazmy se jednotlivě dobře promíchají v ředění.
pufr obsahující konjugát hACE2-HRP rozdělený do malých zkumavek. Poté se směsi přenesou do
jamky mikrotitrační destičky obsahující imobilizovaný rekombinantní RBD fragment (RBD) viru SARS-CoV-2
inkubace. Během 30minutové inkubace byla specifická protilátka RBD v kalibrátorech, QC a
Vzorky budou soutěžit s hACE2-HRP o specifickou vazbu na RBD imobilizovaný v jamkách. Po
Během inkubace se jamky 4krát promyjí, aby se odstranil nenavázaný konjugát hACE2-HRP. Roztok
Poté se přidá TMB a inkubuje se 20 minut při pokojové teplotě, což vede k vývoji
modrá barva. Vývoj barvy se zastaví přidáním 1N HCl a absorbance je
měřeno spektrofotometricky při 450 nm. Intenzita vzniklé barvy je úměrná
množství přítomného enzymu a je nepřímo úměrné množství standardů analyzovaných stejným způsobem.
Porovnáním s kalibrační křivkou vytvořenou dodanými kalibrátory se určí koncentrace
Poté se vypočítá množství neutralizačních protilátek v neznámém vzorku.
【POTŘEBNÉ MATERIÁLY, KTERÉ NEJSOU SOUČÁSTÍ DODÁVKY】
1. Destilovaná nebo deionizovaná voda
2. Přesné pipety: 10 μl, 100 μl, 200 μl a 1 ml
3. Jednorázové pipetovací špičky
4. Čtečka mikrotitračních destiček schopná odečítat absorbanci při 450 nm.
5. Savý papír
6. Milimetrový papír
7. Vortexový mixér nebo ekvivalent
【ODBĚR A SKLADOVÁNÍ VZORKŮ】
1. Pro tuto soupravu lze použít vzorky séra a plazmy odebrané do zkumavek obsahujících K2-EDTA.
2. Vzorky by měly být uzavřeny a před analýzou mohou být skladovány až 48 hodin při teplotě 2 °C - 8 °C.
Vzorky uchovávané delší dobu (až 6 měsíců) by měly být před analýzou zmrazeny pouze jednou při teplotě -20 °C.
Vyhněte se opakovaným cyklům zmrazování a rozmrazování.
PROTOKOL
【Příprava činidla】
1. Všechny činidla musí být před použitím vyjmuty z chladničky a ponechány ohřát na pokojovou teplotu.
(20 °C až 25 °C). Všechny reagencie ihned po použití uchovávejte v chladničce.
2. Všechny vzorky a kontroly je třeba před použitím vortexovat.
3. Příprava roztoku hACE2-HRP: Koncentrát hACE2-HRP zřeďte roztokem v poměru 1:51.
Pufr. Například zřeďte 100 μl koncentrátu hACE2-HRP s 5,0 ml ředicího pufru HRP tak, aby
připravte roztok hACE2-HRP.
4. Příprava 1× promývacího roztoku: Zřeďte 20× promývací roztok deionizovanou nebo destilovanou vodou s
objemovém poměru 1:19. Například zřeďte 20 ml promývacího roztoku 20× s 380 ml deionizovaného nebo
destilované vody k přípravě 400 ml 1× promývacího roztoku.
【Zkušební postup】
1. Do samostatných zkumavek oddělte alikvotní podíly 120 μl připraveného roztoku hACE2-HRP.
2. Do každé zkumavky přidejte 6 μl kalibrátorů, neznámých vzorků a kontrol kvality a dobře promíchejte.
3. Přeneste 100 μl každé směsi připravené v kroku 2 do odpovídajících jamek mikrotitrační destičky dle pokynů.
na předem navrženou konfiguraci testu.
3. Zakryjte destičku těsněním destiček a inkubujte při 37 °C po dobu 30 minut.
4. Odstraňte těsnicí fólii destičky a destičku čtyřikrát promyjte přibližně 300 μl promývacího roztoku 1× na jamku.
5. Po promytí poklepejte destičkou o papírovou utěrku, abyste odstranili zbytky tekutiny v jamkách.
6. Do každé jamky přidejte 100 μl roztoku TMB a inkubujte destičku ve tmě při teplotě 20–25 °C po dobu 20 minut.
7. Do každé jamky přidejte 50 μl zastavovacího roztoku pro zastavení reakce.
8. Odečtěte absorbanci na čtečce mikrodestiček při 450 nm do 10 minut (630 nm je součástí příslušenství).
doporučeno pro vyšší přesnost výkonu).