Testsealabs SARS-CoV-2 neutraliseerivate antikehade tuvastamise komplekt (ELISA)
Lühike kirjeldus:
SARS-CoV-2 neutraliseerivate antikehade testkassett on kiire kromatograafiline immunoloogiline analüüs. See analüüs on loodud koroonaviirushaiguse 2019 vastaste neutraliseerivate antikehade kvalitatiivseks tuvastamiseks. Seda saab kasutada inimese täisvere, seerumi või plasma proovidega. Test on abivahend inimese uudse koroonaviiruse vastaste neutraliseerivate antikehade tiitrite taseme hindamisel.
 Kiired tulemused: laboritäpne minutitega | Laboriklassi täpsus: usaldusväärne ja usaldusväärne |
| Testi kõikjal: laborikülastust pole vaja | Sertifitseeritud kvaliteet: 13485, CE, Mdsap-vastavus |
| Lihtne ja voolujooneline: hõlpsasti kasutatav, null probleemi | Ülim mugavus: testige mugavalt kodus |
【PÕHIMÕTE】
SARS-CoV-2 neutraliseerivate antikehade tuvastamise komplekt põhineb konkureerival ELISA metoodikal.
Kasutades puhastatud retseptori sidumise domeeni (RBD), viiruse ogavalgust (S) pärinevat valku ja peremeesrakku
retseptor ACE2, see test on loodud viiruse ja peremeesorganismi neutraliseeriva interaktsiooni jäljendamiseks.
Kalibraatorid, kvaliteedikontrollid ja seerumi- või plasmaproovid segatakse lahjenduslahuses eraldi hoolikalt läbi.
hACE2-HRP konjugaati sisaldav puhver jaotatakse väikestesse katseklaasidesse. Seejärel kantakse segud üle
mikroplaadi süvendid, mis sisaldavad immobiliseeritud rekombinantset SARS-CoV-2 RBD fragmenti (RBD)
inkubatsioon. 30-minutilise inkubatsiooni ajal RBD-spetsiifilised antikehad kalibraatorites, kvaliteedikontrollis ja
proovid konkureerivad hACE2-HRP-ga süvenditesse immobiliseeritud RBD spetsiifilise sidumise pärast. Pärast
Inkubatsiooni ajal pestakse süvendeid 4 korda, et eemaldada seondumata hACE2-HRP konjugaat. Lahus, mis sisaldab
Seejärel lisatakse TMB ja inkubeeritakse 20 minutit toatemperatuuril, mille tulemusel tekib
sinine värvus. Värvuse teke peatatakse 1N HCl lisamisega ja neeldumine on
mõõdetuna spektrofotomeetriliselt lainepikkusel 450 nm. Tekkinud värvuse intensiivsus on proportsionaalne
olemasoleva ensüümi kogusest ja on pöördvõrdeline samal viisil analüüsitud standardite hulgaga.
Võrreldes kaasasolevate kalibraatorite abil moodustatud kalibreerimiskõveraga, saadakse kontsentratsioon
Seejärel arvutatakse tundmatus proovis neutraliseerivad antikehad.
【VAJALIKUD, KUID MITTE KAASAS OLEVAD MATERJALID】
1. Destilleeritud või deioniseeritud vesi
2. Täppispipetid: 10 μL, 100 μL, 200 μL ja 1 ml
3. Ühekordsed pipetiotsikud
4. Mikroplaadilugeja, mis suudab lugeda neeldumist lainepikkusel 450 nm.
5. Imav paber
6. Graafikapaber
7. Vortex-segisti või samaväärne seade
【PROOVIDE KOGUMINE JA SÄILITAMINE】
1. Selle komplekti jaoks saab kasutada K2-EDTA-d sisaldavatesse tuubidesse kogutud seerumi- ja plasmaproove.
2. Proovid tuleks enne analüüsimist sulgeda ja neid võib säilitada kuni 48 tundi temperatuuril 2–8 °C.
Pikemat aega (kuni 6 kuud) hoitud proove tuleks enne analüüsi külmutada ainult üks kord temperatuuril -20 °C.
Vältida korduvaid külmutamise-sulatamise tsükleid.
PROTOKOLL
【Reaktiivi ettevalmistamine】
1. Kõik reagendid tuleb enne kasutamist külmkapist välja võtta ja lasta toatemperatuurini soojeneda.
(20–25 °C). Pärast kasutamist pange kõik reagendid kohe külmkappi.
2. Kõiki proove ja kontrolle tuleb enne kasutamist vorteksis segada.
3. hACE2-HRP lahuse valmistamine: lahjendage hACE2-HRP kontsentraat lahjendussuhtega 1:51 lahjenduslahusega
Puhver. Näiteks lahjendage 100 μL hACE2-HRP kontsentraati 5,0 ml HRP lahjenduspuhvriga, et
Valmistage hACE2-HRP lahus.
4. 1× pesulahuse valmistamine: Lahjendage 20× pesulahust deioniseeritud või destilleeritud veega, kasutades
mahu suhe 1:19. Näiteks lahjendage 20 ml 20× pesulahust 380 ml deioniseeritud või
destilleeritud vett 400 ml 1× pesulahuse valmistamiseks.
【Katsemenetlus】
1. Jaotage eraldi katseklaasidesse 120 μL ettevalmistatud hACE2-HRP lahust.
2. Lisage igasse katseklaasi 6 μL kalibraatoreid, tundmatuid proove ja kvaliteedikontrolle ning segage hoolikalt.
3. Kandke 100 μL igast 2. etapis valmistatud segust vastavatesse mikrotiiterplaadi süvenditesse vastavalt juhistele.
eelnevalt kavandatud testimiskonfiguratsioonile.
3. Katke plaat plaaditihendajaga ja inkubeerige temperatuuril 37 °C 30 minutit.
4. Eemaldage plaaditihend ja peske plaati umbes 300 μL 1× pesulahusega süvendi kohta neli korda.
5. Pärast pesemist koputage plaati paberrätiku vastu, et eemaldada süvenditesse jäänud vedelik.
6. Lisage igasse süvendisse 100 μL TMB lahust ja inkubeerige plaati pimedas temperatuuril 20–25 °C 20 minutit.
7. Reaktsiooni peatamiseks lisage igasse süvendisse 50 μL stopplahust.
8. Lugege mikroplaadilugejas neeldumist 450 nm juures 10 minuti jooksul (630 nm on lisatarvik).
soovitatav suurema täpsuse saavutamiseks).