کیت تشخیص آنتیبادی خنثیکننده SARS-CoV-2 (ELISA) Testselabs
شرح مختصر:
کاست تست آنتیبادی خنثیکننده SARS-CoV-2 یک روش ایمونواسی کروماتوگرافی سریع است. این روش برای تشخیص کیفی آنتیبادیهای خنثیکننده علیه بیماری کروناویروس 2019 طراحی شده است. میتوان از آن با نمونههای خون کامل، سرم یا پلاسمای انسان استفاده کرد. این آزمایش به عنوان کمکی در ارزیابی سطح تیترهای آنتیبادی خنثیکننده ضد کروناویروس جدید انسانی عمل میکند.
 نتایج سریع: دقت آزمایشگاهی در عرض چند دقیقه | دقت در حد آزمایشگاه: قابل اعتماد و اطمینان |
| آزمایش در هر مکانی: نیازی به مراجعه حضوری به آزمایشگاه نیست | کیفیت گواهیشده: ۱۳۴۸۵، CE، مطابق با Mdsap |
| ساده و روان: استفاده آسان، بدون دردسر | نهایت راحتی: به راحتی در خانه آزمایش کنید |
【اصل】
کیت تشخیص آنتیبادی خنثیکننده SARS-CoV-2 مبتنی بر روش ELISA رقابتی است.
با استفاده از دامنه اتصال گیرنده خالصشده (RBD)، پروتئین حاصل از پروتئین اسپایک (S) ویروسی و سلول میزبان
گیرنده ACE2، این آزمایش برای تقلید از تعامل خنثیسازی ویروس-میزبان طراحی شده است.
کالیبراتورها، کنترل کیفیت و نمونههای سرم یا پلاسما به صورت جداگانه و به خوبی رقیق میشوند.
بافر حاوی کونژوگه hACE2-HRP در لولههای کوچک تقسیم میشود. سپس مخلوطها به داخل منتقل میشوند
چاهکهای میکروپلیت حاوی قطعه RBD نوترکیب تثبیتشده SARS-CoV-2 (RBD) برای
انکوباسیون. در طول انکوباسیون 30 دقیقهای، آنتیبادی اختصاصی RBD در کالیبراتورها، QC و
نمونهها برای اتصال اختصاصی به RBD تثبیتشده در چاهکها با hACE2-HRP رقابت خواهند کرد. پس از آن
در طول انکوباسیون، چاهکها ۴ بار شسته میشوند تا hACE2-HRP کونژوگه نشده حذف شود. محلولی از
سپس TMB اضافه شده و به مدت 20 دقیقه در دمای اتاق انکوبه میشود که منجر به ایجاد ...
رنگ آبی. ایجاد رنگ با افزودن 1N HCl متوقف میشود و جذب به صورت زیر است:
به روش اسپکتروفتومتری در طول موج ۴۵۰ نانومتر اندازهگیری شد. شدت رنگ تشکیل شده متناسب با
مقدار آنزیم موجود، و با مقدار استانداردهایی که به همان روش سنجش میشوند، رابطه معکوس دارد.
از طریق مقایسه با منحنی کالیبراسیون تشکیل شده توسط کالیبراتورهای ارائه شده، غلظت
سپس آنتیبادیهای خنثیکننده در نمونه ناشناخته محاسبه میشوند.
【مواد مورد نیاز اما ارائه نشده】
۱. آب مقطر یا دیونیزه
۲. پیپتهای دقیق: ۱۰ میکرولیتر، ۱۰۰ میکرولیتر، ۲۰۰ میکرولیتر و ۱ میلیلیتر
۳. سرپیپتهای یکبار مصرف
۴. دستگاه خوانش میکروپلیت که قادر به خواندن جذب در طول موج ۴۵۰ نانومتر است.
۵. کاغذ جاذب رطوبت
۶. کاغذ شطرنجی
۷. میکسر ورتکس یا معادل آن
【جمعآوری و نگهداری نمونه】
۱. نمونههای سرم و پلاسما که در لولههای حاوی K2-EDTA جمعآوری شدهاند، میتوانند برای این کیت استفاده شوند.
۲. نمونهها باید دربدار باشند و میتوانند تا ۴۸ ساعت در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتیگراد قبل از سنجش نگهداری شوند.
نمونههایی که برای مدت طولانیتری (تا ۶ ماه) نگهداری میشوند، باید فقط یک بار قبل از سنجش در دمای ۲۰- درجه سانتیگراد منجمد شوند.
از چرخههای مکرر انجماد و ذوب خودداری کنید.
پروتکل
【آماده سازی معرف】
۱. تمام معرفها باید قبل از استفاده از یخچال خارج شده و به دمای اتاق برسند.
(20 تا 25 درجه سانتیگراد). تمام معرفها را بلافاصله پس از استفاده در یخچال نگهداری کنید.
۲. تمام نمونهها و نمونههای کنترل باید قبل از استفاده ورتکس شوند.
۳. تهیه محلول hACE2-HRP: کنسانتره hACE2-HRP را با نسبت رقت ۱:۵۱ با محلول رقیقسازی رقیق کنید.
بافر. به عنوان مثال، ۱۰۰ میکرولیتر از کنسانتره hACE2-HRP را با ۵.۰ میلیلیتر از بافر رقیقسازی HRP رقیق کنید تا
یک محلول hACE2-HRP تهیه کنید.
۴. تهیه محلول شستشو ۱×: محلول شستشو ۲۰× را با آب دیونیزه یا مقطر رقیق کنید.
نسبت حجمی ۱:۱۹. به عنوان مثال، ۲۰ میلیلیتر از محلول شستشوی ۲۰× را با ۳۸۰ میلیلیتر محلول دیونیزه یا
آب مقطر برای تهیه ۴۰۰ میلیلیتر محلول شستشو ۱×.
【روش آزمایش】
۱. در لولههای جداگانه، ۱۲۰ میکرولیتر از محلول hACE2-HRP آماده شده را به طور مساوی بریزید.
۲. ۶ میکرولیتر از کالیبراتورها، نمونههای مجهول و کنترلهای کیفی را در هر لوله اضافه کرده و خوب مخلوط کنید.
۳. ۱۰۰ میکرولیتر از هر مخلوط تهیه شده در مرحله ۲ را به چاهکهای میکروپلیت مربوطه مطابق با دستورالعمل منتقل کنید.
به پیکربندی آزمایشی از پیش طراحی شده.
۳. پلیت را با Plate Sealer بپوشانید و به مدت ۳۰ دقیقه در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد انکوبه کنید.
۴. درزگیر پلیت را بردارید و پلیت را با تقریباً ۳۰۰ میکرولیتر از ۱× محلول شستشو در هر چاهک، چهار بار بشویید.
۵. پس از مراحل شستشو، پلیت را روی دستمال کاغذی بکوبید تا مایع باقیمانده در چاهکها خارج شود.
6. 100 میکرولیتر محلول TMB را به هر چاهک اضافه کنید و پلیت را به مدت 20 دقیقه در تاریکی و دمای 20 تا 25 درجه سانتیگراد انکوبه کنید.
7. برای توقف واکنش، 50 میکرولیتر محلول متوقف کننده به هر چاهک اضافه کنید.
۸. جذب را در دستگاه میکروپلیت ریدر در طول موج ۴۵۰ نانومتر ظرف ۱۰ دقیقه بخوانید (۶۳۰ نانومتر به عنوان وسیله جانبی در نظر گرفته شده است)
برای عملکرد با دقت بالاتر توصیه میشود).