Saers-cov-2 a 'cur a-mach pasgan lorg antibody (Elisa)
【Prionnsapal】
Tha an t-Sars-COV-2 a 'cur a-mach a' phasgan lorg antibody atibody stèidhichte air modh farpaiseach Elisa.
A 'cleachdadh a' cleachdadh gabh-glanaidh purmat purmat bainping (rbd), pròtain bho phròtain (ean) puinnsearan no an cealla aoigheachd
Gabhadair ace2, tha an deuchainn seo air a dhealbhadh gus a 'bhìoras-bhìoras a chuir a-mach ag amas air eadar-obrachadh.
Tha Calcrators, smachdan càileachd, agus sampaill Serum no Plasma no plasma air an luachadh gu math ann an dilution
bufair a 'toirt a-steach co-chòrdadh ris a' cho-chòrdadh ann an tiùban beaga. An uairsin thèid na measgannan a ghluasad a-steach
na tobraichean microplate anns a bheil mearabachd cav-1 remmobilized neo-dhreuchdail (RBD) airson
goir. Tron Biadh 30-mionaid, an t-urrasdair sònraichte RBAD anns na Calcrators, QC agus
Bidh sampaill a 'farpais ris an Hace2-HR airson ceangal sònraichte a dhèanamh air an RBD immolized anns na tobraichean. Às deidh
an goir, thèid na tobraichean a nighe 4 tursan gus a dhol air falbh lùbte Hace2-HRPAN. Fuasgladh de
An uairsin tha TB an uairsin air a chur ris agus air a pharachadh airson 20 mionaid aig teòthachd an t-seòmair, agus mar thoradh air sin a thaobh leasachadh a
dath gorm. Tha an leasachadh dath air a stad le 1n HCL a bharrachd, agus tha an t-intombance
air a thomhas litreachadh aig 450 nm. Tha dian an dath a chaidh a chruthachadh co-rèireach ris an
Meud enzyme an làthair, agus tha e co-cheangailte gu cruaidh ris na h-inbhean a tha na inbhidhean a 'toirt buaidh air san aon dòigh.
Tro coimeas ris an lùb calibration air a chruthachadh leis na Calibrators a chaidh a thoirt seachad, dùmhlachd na
Tha antibodies neodrach a 'nochdadh an sampall neo-aithnichte an uairsin air a thomhas.
【Stuthan a tha a dhìth ach nach eil air a thoirt seachad】
1. Air a ghràachadh no air a sgaradh no air a sgaradh
2. Pìob-pìoban-pìoban: 10μl, 100μl, 200μl agus 1 ml
3. Molaidhean pìoba cuidhteasach
4. Neach-leughaidh microplate a tha comasach air a bhith a 'leughadh a-steach aig 450mm.
5. Pàipear sùghaidh
6. Pàipear graf
7. Measgais Vortex no a leithid
【Cruinneachadh agus stòradh sampaill】
1. Tha sampaill Serum agus Plasma agus Plasma a chaidh a chruinneachadh ann an tubaichean anns an urrainnear K2-EDA a chleachdadh airson a 'chiamaidh seo.
2. Bu chòir sampallan a bhith fo chruadhachadh agus faodar a stòradh airson suas ri 48 uair a thìde aig 2 ° C - 8 ° C mus tug e Asday.
Bu chòir sampallan a tha air an cumail airson ùine nas fhaide (suas ri 6 mìosan) a bhith reòta dìreach aon uair ann an -20 ° C ron àm as fheàrr.
Seachain cuairtean-cearcall a-rithist.
Protocol
【Ullachadh taiment】
1. Feumar a h-uile mionaideachd a thoirt a-mach bho fhuarachadh agus leig cead tilleadh gu teòthachd an t-seòmair mus cleachd thu
(20 ° gu 25 ° C). Sàbhail a h-uile ath-choimeas ann an regrisherator gu sgiobalta às deidh an cleachdadh.
2. Bu chòir a h-uile sampalachd agus smachdan a bhith air an toirt a-steach mus tèid a chleachdadh.
3. Ullachadh Fuasgladh Hace2-holp: Dilate Hace2-HRPAN A 'GABHAIL A-STEACH A-STEACH AIG 1: 51 co-mheas dìcheachd le dathan
Bufair. Mar eisimpleir, tha Dilute 100 μl de Hace2-HRPAN a 'cuimseachadh le 5.0ml de bhufair toraidh HRP gu
fuasgladh hace2-hrp.
4. 1 × × làn uime useling: DLEATE AN RIAGHLADH URRAS 20 × × × × × × × ×
co-mheas leabhar de 1:19. Mar eisimpleir, Dillute 20 ml de fhuasgladh rèidh 20 × ×S le 380 ml de deionized no
uisge grùide gus 400 ml de fhuasgladh 1 × a dhèanamh.
【Modhan deuchainn】
1. Ann an tiùban air leth, aliquot 120μl de am fuasgladh hace2-hrp ullaichte.
2. Cuir 6 μl de luchd-calibrators, sanasachd neo-aithnichte, smachdan càileachd anns gach tiùb agus measgachadh gu math.
3. TRÌOMH DÙTHCHAS 100 TRÌOMH de gach measgachadh air ullachadh anns a 'cheum 2 ann an tobraichean microplate co-ionann a rèir
gu rèiteachaidh deuchainn ro-làimh.
3. Còmhdaich a 'phlàta le pleit an t-suidheachain agus gu forbate aig 37 ° C airson 30 mionaid.
4. Thoir air falbh an t-seile-cheartaich agus a 'nighe an truinnsear le timcheall air 300 μl de fhuasgladh 1 × × × fuasgladh gach piseach gach neach-obrach.
5. Tap air a 'phlàta air searbhadair pàipeir gus leaghan ath-fhilleadh a thoirt air falbh anns na tobraichean às deidh ceumannan nighe a thoirt air falbh.
6. Cuir 100 μl de fhuasgladh TBB GU GACH SILE AN T-SAOGHAL ANN AN DONGAND aig 20 - 25 ° C airson 20 mionaid.
7. Cuir 50 μl de stad air fuasgladh air gach fear gus stad a chuir air a 'fhreagairt.
8. Leugh an t-sùbailteachd ann an leughadair microplate aig 450 nm taobh a-staigh 10 mionaidean (630NM mar a tha accessory
air a mholadh airson coileanadh cruinn-ìre).