SARS-COV-2 એન્ટિબોડી ડિટેક્શન કીટ (ELISA)
.મૂળ.
SARS-COV-2 ને તટસ્થ એન્ટિબોડી ડિટેક્શન કીટ સ્પર્ધાત્મક ELISA પદ્ધતિ પર આધારિત છે.
શુદ્ધ રીસેપ્ટર બંધનકર્તા ડોમેન (આરબીડી) નો ઉપયોગ કરીને, વાયરલ સ્પાઇક (ઓ) પ્રોટીનમાંથી પ્રોટીન અને યજમાન કોષ
રીસેપ્ટર એસીઇ 2, આ પરીક્ષણ વાયરસ-યજમાન તટસ્થ ક્રિયાપ્રતિક્રિયાની નકલ કરવા માટે બનાવવામાં આવ્યું છે.
કેલિબ્રેટર્સ, ગુણવત્તા નિયંત્રણો અને સીરમ અથવા પ્લાઝ્મા નમૂનાઓ વ્યક્તિગત રીતે મંદમાં સારી રીતે મિશ્રિત છે
નાના ટ્યુબમાં HECE2-HRP ક j ન્જ્યુગેટ ધરાવતા બફર. પછી મિશ્રણમાં સ્થાનાંતરિત થાય છે
માઇક્રોપ્લેટ કુવાઓ જેમાં સ્થિર રિકોમ્બિનન્ટ સાર્સ-કોવ -2 આરબીડી ફ્રેગમેન્ટ (આરબીડી) છે
સેવન. 30 મિનિટના સેવન દરમિયાન, કેલિબ્રેટર્સમાં આરબીડી વિશિષ્ટ એન્ટિબોડી, ક્યુસી અને
કુવાઓમાં સ્થિર આરબીડી ચોક્કસ બંધનકર્તા માટે નમૂનાઓ એચએસીઇ 2-એચઆરપી સાથે સ્પર્ધા કરશે. પછી
સેવન, કુવાઓ અનબાઉન્ડ HACE2-HRP ક j ન્જુગેટને દૂર કરવા માટે 4 વખત ધોવાઇ જાય છે. એક સમાધાન
ત્યારબાદ ટીએમબી ઉમેરવામાં આવે છે અને ઓરડાના તાપમાને 20 મિનિટ સુધી સેવામાં આવે છે, પરિણામે એનો વિકાસ થાય છે
વાદળી રંગ. રંગ વિકાસ 1 એન એચસીએલના ઉમેરા સાથે બંધ થાય છે, અને શોષણ છે
450 એનએમ પર સ્પેક્ટ્રોફોટોમેટ્રિકલી માપવામાં આવે છે. રચાયેલ રંગની તીવ્રતા પ્રમાણસર છે
હાજર એન્ઝાઇમની માત્રા, અને તે જ રીતે ઉશ્કેરવામાં આવેલા ધોરણોની માત્રા સાથે verse લટું સંબંધિત છે.
પ્રદાન કરેલા કેલિબ્રેટર્સ દ્વારા રચાયેલ કેલિબ્રેશન વળાંક સાથે સરખામણી દ્વારા, એકાગ્રતા
અજ્ unknown ાત નમૂનામાં એન્ટિબોડીઝને તટસ્થ બનાવવાની પછી ગણતરી કરવામાં આવે છે.
.સામગ્રી જરૂરી છે પરંતુ પૂરી પાડવામાં આવતી નથી.
1. નિસ્યંદિત અથવા ડીયોનાઇઝ્ડ પાણી
2. ચોકસાઇ પીપેટ્સ: 10μl, 100μl, 200μl અને 1 મિલી
3. નિકાલજોગ પાઇપેટ ટીપ્સ
4. માઇક્રોપ્લેટ રીડર 450nm પર શોષણ વાંચવા માટે સક્ષમ છે.
5. શોષક કાગળ
6. ગ્રાફ પેપર
7. વમળ મિક્સર અથવા સમકક્ષ
.નમૂનાન સંગ્રહ અને સંગ્રહ.
1. કે 2-ઇડીટીએવાળી નળીઓમાં એકત્રિત સીરમ અને પ્લાઝ્મા નમૂનાઓનો ઉપયોગ આ કીટ માટે થઈ શકે છે.
2. નમુનાઓ કેપ્ડ કરવા જોઈએ અને ase 48 કલાક સુધી 2 ડિગ્રી સે.
લાંબા સમય સુધી (6 મહિના સુધી) રાખવામાં આવેલા નમુનાઓ પર્યાય પહેલાં ફક્ત એક જ વાર -20 ° સે તાપમાને સ્થિર થવો જોઈએ.
પુનરાવર્તિત ફ્રીઝ-ઓગળવાના ચક્રને ટાળો.
પ્રોટોકોલ
.પ્રતિક્રિયાની તૈયારી.
1. બધા રીએજન્ટ્સને રેફ્રિજરેશનમાંથી બહાર કા and વા જોઈએ અને ઉપયોગ કરતા પહેલા ઓરડાના તાપમાને પાછા ફરવાની મંજૂરી આપવી આવશ્યક છે
(20 ° થી 25 ° સે). ઉપયોગ પછી તરત જ રેફ્રિજરેટરમાં બધા રીએજન્ટ્સ સાચવો.
2. ઉપયોગ કરતા પહેલા બધા નમૂનાઓ અને નિયંત્રણો વમળવા જોઈએ.
3. HACE2-HRP સોલ્યુશનની તૈયારી: પાતળા HACE2-HRP 1: 51 પર ડિલ્યુશન રેશિયો પર ડિલ્યુશન રેશિયો
બફર. ઉદાહરણ તરીકે, એચ.એ.સી. 2-એચઆરપીના 100 μL ને એચઆરપી ડિલ્યુશન બફરના 5.0 એમએલ સાથે કેન્દ્રિત કરો
HACE2-HRP સોલ્યુશન બનાવો.
.
1:19 નો વોલ્યુમ રેશિયો. ઉદાહરણ તરીકે, 20 મિલી 20 × વ wash શ સોલ્યુશનને 380 મિલી ડીયોનાઇઝ્ડ અથવા
400 મિલી 1 × ધોવા સોલ્યુશન બનાવવા માટે નિસ્યંદિત પાણી.
.પરીક્ષણ પદ્ધતિ.
1. અલગ ટ્યુબમાં, તૈયાર HACE2-HRP સોલ્યુશનના અલિકોટ 120μl.
2. દરેક ટ્યુબમાં 6 μL કેલિબ્રેટર્સ, અજાણ્યા નમૂનાઓ, ગુણવત્તા નિયંત્રણો ઉમેરો અને સારી રીતે ભળી દો.
3. પગલા 2 માં તૈયાર કરેલા દરેક મિશ્રણના 100μl ને અનુરૂપ માઇક્રોપ્લેટ કુવાઓમાં સ્થાનાંતરિત કરો
પૂર્વનિર્ધારિત પરીક્ષણ ગોઠવણી માટે.
3. પ્લેટ સીલરથી પ્લેટને Cover ાંકી દો અને 30 મિનિટ માટે 37 ° સે.
.
5. ધોવાનાં પગલા પછી કુવાઓમાં અવશેષ પ્રવાહી દૂર કરવા માટે કાગળના ટુવાલ પર પ્લેટ ટેપ કરો.
6. દરેક કૂવામાં 100 μL ટીએમબી સોલ્યુશન ઉમેરો અને 20 મિનિટ માટે 20 - 25 ° સે પર અંધારામાં પ્લેટને સેવન કરો.
7. પ્રતિક્રિયા રોકવા માટે દરેક કૂવામાં 50 μl સ્ટોપ સોલ્યુશન ઉમેરો.
8. 10 મિનિટની અંદર 450 એનએમ પર માઇક્રોપ્લેટ રીડરમાં શોષણ વાંચો (સહાયક તરીકે 630nm છે
ઉચ્ચ ચોકસાઇ પ્રદર્શન માટે ભલામણ).