Testsealabs komplet za detekciju neutralizirajućih antitijela protiv SARS-CoV-2 (ELISA)
Kratki opis:
Testna kazeta za neutralizirajuća antitijela SARS-CoV-2 je brzi imunološki kromatografski test. Ovaj test je dizajniran za kvalitativno otkrivanje neutralizirajućih antitijela protiv koronavirusne bolesti 2019. Može se koristiti s uzorcima ljudske krvi, seruma ili plazme. Test služi kao pomoć u procjeni razina titara neutralizirajućih antitijela protiv novog koronavirusa kod ljudi.
 Brzi rezultati: Laboratorijski točni za nekoliko minuta | Laboratorijska preciznost: Pouzdano i pouzdano |
| Testirajte bilo gdje: Nije potreban posjet laboratoriju | Certificirana kvaliteta: 13485, CE, usklađeno s Mdsap-om |
| Jednostavno i optimizirano: Lako za korištenje, bez muke | Vrhunska praktičnost: Udobno testiranje kod kuće |
【NAČELO】
Komplet za detekciju neutralizirajućih antitijela protiv SARS-CoV-2 temelji se na kompetitivnoj ELISA metodologiji.
Korištenjem pročišćene domene za vezanje receptora (RBD), proteina iz proteina virusnog šiljka (S) i stanice domaćina
receptor ACE2, ovaj test je osmišljen kako bi oponašao neutralizirajuću interakciju virusa i domaćina.
Kalibratori, kontrole kvalitete i uzorci seruma ili plazme pojedinačno se dobro miješaju u razrjeđenju
pufer koji sadrži hACE2-HRP konjugat alikvotiran u male epruvete. Zatim se smjese prenose u
jažice mikroploče koje sadrže imobilizirani rekombinantni RBD fragment SARS-CoV-2 (RBD) za
inkubacija. Tijekom 30-minutne inkubacije, RBD specifična antitijela u kalibratorima, QC i
Uzorci će se natjecati s hACE2-HRP-om za specifično vezanje RBD-a imobiliziranog u jažicama. Nakon
inkubacije, jažice se isperu 4 puta kako bi se uklonio nevezani hACE2-HRP konjugat. Otopina
Zatim se doda TMB i inkubira 20 minuta na sobnoj temperaturi, što rezultira razvojem
plava boja. Razvoj boje se zaustavlja dodatkom 1N HCl, a apsorbancija je
izmjereno spektrofotometrijski na 450 nm. Intenzitet nastale boje proporcionalan je
količina prisutnog enzima i obrnuto je proporcionalna količini standarda analiziranih na isti način.
Usporedbom s kalibracijskom krivuljom koju su formirali priloženi kalibratori, koncentracija
Zatim se izračunava količina neutralizirajućih antitijela u nepoznatom uzorku.
【POTREBNI MATERIJALI KOJI NISU OSIGURANI】
1. Destilirana ili deionizirana voda
2. Precizne pipete: 10 μL, 100 μL, 200 μL i 1 mL
3. Vrhovi pipeta za jednokratnu upotrebu
4. Čitač mikroploča sposoban za očitavanje apsorbancije na 450 nm.
5. Upijajući papir
6. Milimetarski papir
7. Vrtložni mikser ili ekvivalent
【PRIKUPLJANJE I SKLADIŠTENJE UZORAKA】
1. Za ovaj komplet mogu se koristiti uzorci seruma i plazme prikupljeni u epruvete koje sadrže K2-EDTA.
2. Uzorke treba zatvoriti i mogu se čuvati do 48 sati na temperaturi od 2 °C do 8 °C prije ispitivanja.
Uzorke koji se čuvaju dulje vrijeme (do 6 mjeseci) treba zamrznuti samo jednom na -20 °C prije analize.
Izbjegavajte ponovljene cikluse smrzavanja i odmrzavanja.
PROTOKOL
【Priprema reagensa】
1. Sve reagense treba izvaditi iz hladnjaka i ostaviti da se vrate na sobnu temperaturu prije upotrebe.
(20° do 25°C). Sve reagense odmah nakon upotrebe spremite u hladnjak.
2. Sve uzorke i kontrole treba promiješati u vrtlogu prije upotrebe.
3. Priprema otopine hACE2-HRP: Razrijedite koncentrat hACE2-HRP u omjeru razrjeđivanja 1:51 s otopinom za razrjeđivanje
Pufer. Na primjer, razrijedite 100 μL koncentrata hACE2-HRP s 5,0 mL pufera za razrjeđivanje HRP-a do
Napravite hACE2-HRP otopinu.
4. Priprema 1× otopine za pranje: Razrijedite 20× otopinu za pranje deioniziranom ili destiliranom vodom s
omjer volumena 1:19. Na primjer, razrijedite 20 mL otopine za pranje 20× s 380 mL deioniziranog ili
destilirane vode za pripremu 400 mL 1× otopine za ispiranje.
【Postupak ispitivanja】
1. U odvojene epruvete, uzmite alikvote od 120 μL pripremljene otopine hACE2-HRP.
2. U svaku epruvetu dodajte 6 μL kalibratora, nepoznatih uzoraka, kontrola kvalitete i dobro promiješajte.
3. Prenesite 100 μL svake smjese pripremljene u koraku 2 u odgovarajuće jažice mikropločice prema
prema unaprijed dizajniranoj konfiguraciji testiranja.
3. Pokrijte ploču folijom za brtvljenje ploča i inkubirajte na 37°C tijekom 30 minuta.
4. Uklonite foliju za brtvljenje ploče i isperite ploču s otprilike 300 μL 1× otopine za pranje po jažici četiri puta.
5. Kucnite ploču o papirnati ručnik kako biste uklonili preostalu tekućinu u jažicama nakon pranja.
6. U svaku jažicu dodajte 100 μL otopine TMB-a i inkubirajte ploču u mraku na 20 - 25 °C tijekom 20 minuta.
7. U svaku jažicu dodajte 50 μL otopine za zaustavljanje reakcije.
8. Očitajte apsorbanciju u čitaču mikropločica na 450 nm unutar 10 minuta (630 nm kao dodatak je
preporučuje se za veću preciznost).