SARS-COV-2 netralize twous deteksyon antikò (ELISA)
【Prensip】
SARS-COV-2 netralize twous deteksyon antikò a baze sou metodoloji konpetitif ELISA.
Sèvi ak pirifye domèn obligatwa reseptè (RBD), pwoteyin soti nan Spike viral (s) pwoteyin la ak selil la lame
Reseptè ACE2, se tès sa a ki fèt yo imite viris-lame entèraksyon an netralize.
Kalibratè, kontwòl kalite, ak serom oswa echantiyon plasma yo endividyèlman melanje byen nan dilution
Tanpon ki gen HACE2-HRP konjige alikere nan ti tib. Lè sa a, melanj yo transfere nan
Pwi yo mikroplat ki gen immobilized recombinant SARS-CoV-2 fragman RBD (RBD) pou
enkubasyon. Pandan enkubasyon an 30-minit, RBD antikò a espesifik nan kalibratè yo, QC ak
Echantiyon yo pral fè konpetisyon ak HACE2-HRP a pou espesifik obligatwa RBD a imobilize nan pwi yo. Dèyè
Enkubasyon an, pwi yo lave 4 fwa yo retire konjige HACE2-HRP ki pa lye. Yon solisyon nan
TMB Lè sa a, te ajoute ak enkubasyon pou 20 minit nan tanperati chanm, sa ki lakòz devlopman nan yon
koulè ble. Se devlopman nan koulè sispann ak adisyon a nan 1n kloridrat, ak absorption a se
mezire spektrofotometrikman nan 450 nm. Entansite a nan koulè a ki te fòme pwopòsyonèl ak la
Kantite lajan an nan anzim prezan, epi li se envès ki gen rapò ak kantite lajan an nan estanda assayed nan menm fason an.
Atravè konparezon ak koub la kalibrasyon ki te fòme pa kalibratè yo bay yo, konsantrasyon an nan
Se antikò netralize nan echantiyon an enkoni Lè sa a, kalkile.
【Materyèl obligatwa men pa bay】
1. dlo distile oswa deionized
2. Pipèt presizyon: 10μl, 100μl, 200μl ak 1 ml
3. Konsèy pipèt jetab
4. Microplate lektè ki kapab li absorption nan 450Nm.
5. Papye absòbe
6. Papye graf
7. Vortex mixer oswa ekivalan
【Koleksyon echantiyon ak depo】
1. Echantiyon serom ak plasma yo kolekte nan tib ki gen K2-EDTA ka itilize pou twous sa a.
2. Echantiyon yo ta dwe limite epi yo ka estoke pou jiska 48 èdtan nan 2 ° C - 8 ° C anvan tès la.
Echantiyon ki te fèt pou yon tan ki pi long (jiska 6 mwa) yo ta dwe jele sèlman yon fwa nan -20 ° C anvan tès.
Evite repete sik friz-efondreman.
Pwotokòl
【Preparasyon reyaktif】
1. Tout reyaktif yo dwe pran soti nan refrijerasyon ak pèmèt yo retounen nan tanperati chanm anvan yo itilize
(20 ° a 25 ° C). Sove tout reyaktif nan frijidè san pèdi tan apre yo fin itilize.
2. Tout echantiyon ak kontwòl yo ta dwe vortexed anvan ou itilize.
3. Preparasyon solisyon HACE2-HRP: Dilye HACE2-HRP konsantre nan 1: 51 rapò dilution ak dilution
Tanpon. Pou egzanp, delye 100 μl nan HACE2-HRP konsantre ak 5.0ml nan HRP dilution tanpon a
Fè yon solisyon HACE2-HRP.
4. 1 × lave preparasyon solisyon: delye solisyon an 20 × lave ak dlo deionized oswa distile ak yon
Rapò volim nan 1:19. Pou egzanp, delye 20 ml 20 × solisyon lave ak 380 ml deionized oswa
Dlo distile pou fè 400 ml 1 × solisyon lave.
【Pwosedi Tès】
1. Nan tib separe, alikòt 120μl nan solisyon an prepare HACE2-HRP.
2. Ajoute 6 μl kalibratè, echantiyon enkoni, kontwòl kalite nan chak tib epi melanje byen.
3. Transfè 100μl nan chak melanj prepare nan etap 2 a nan korespondan pwi mikroplat dapre
Predesigned konfigirasyon tès la.
3. Kouvri plak la ak plafon plak ak enkubate nan 37 ° C pou 30 minit.
4. Retire plafon plak la epi lave plak la ak apeprè 300 μl nan 1 × solisyon lave pou chak wellfor kat fwa.
5. Tape plak la sou sèvyèt papye yo retire likid rezidyèl nan pwi yo apre lave etap.
6. Ajoute 100 μl nan solisyon TMB nan chak byen ak enkubate plak la nan fè nwa nan 20 - 25 ° C pou 20 minit.
7. Ajoute 50 μl nan solisyon sispann nan chak byen yo sispann reyaksyon an.
8. Li absorption a nan lektè mikroplat nan 450 nm nan 10 minit (630Nm kòm akseswar se
rekòmande pou pi wo pèfòmans presizyon).