SARS-Cov-2 Չեզոքացնում է հակամարմինների հայտնաբերման հավաքակազմը (Elisa)
【Սկզբունք】
SARS-Cov-2 Չեզոքացնող հակամարմինների հայտնաբերման հավաքակազմը հիմնված է Ելիսայի մրցակցային մեթոդաբանության վրա:
Օգտագործելով մաքրված ընկալիչ պարտադիր տիրույթի (RBD), սպիտակուցային բուրգերի (ներ) ի սպիտակուցներից եւ հյուրընկալող բջիջից
ընկալիչ ACE2, այս թեստը նախատեսված է վիրուսային հյուրընկալողի չեզոքացնող փոխազդեցության ընդօրինակման համար:
Calibrators- ը, որակի հսկողությունը եւ շիճուկի կամ պլազմային նմուշները անհատապես խառնվում են նոսրացման մեջ
Buffer պարունակող Hace2-HRP կոնյուկատը միամիտ խողովակների մեջ: Այնուհետեւ խառնուրդները փոխանցվում են
Microplate Wells- ը, որոնք պարունակում են անշարժացված վերականգնող SARS-Cov-2 RBD հատված (RBD)
Ինկուբացիա 30 րոպեանոց ինկուբացիայի ընթացքում `Calibrators- ի RBD հատուկ հակամարմինում, QC եւ
Նմուշները կմրցեն Hace2-HRP- ի հետ `ջրհորներում անշարժ գույքի անշարժ գույքի հատուկ պարտադիր: Հետո
Ինկուբացիան, ջրհորները լվանում են 4 անգամ `հեռացնելու համար անսահման ժապավեն 2-HRP կոնյուգատը հեռացնելու համար: Լուծում
TMB- ն այնուհետեւ ավելացվում եւ ինկուբացվում է 20 րոպե սենյակի ջերմաստիճանում, որի արդյունքում հանգեցնում է ա
Կապույտ գույն: Գույնի զարգացումը դադարեցված է 1n HCl- ի հավելումով, իսկ կլանումը
չափված սպեկտրոֆոտոմետրիկորեն 450 նմ է: Ձեւավորված գույնի ինտենսիվությունը համամասն է
Զվարճանքի ներկա ֆերմենտային քանակը եւ հակադարձվում է նույն ձեւով գնահատված ստանդարտների չափի հետ:
Համեմատության միջոցով տրամադրված տրամաչափիչների կողմից ձեւավորված տրամաչափման կորի հետ, համակենտրոնացումը
Անհայտ նմուշում հակամարմինները չեզոքացնելը հաշվարկվում է:
【Պահանջվող նյութեր, բայց չեն տրամադրվում】
1. Թորած կամ դեոնիզացված ջուր
2-ը: Prec շգրիտ պղպեղներ, 10 Հայլ, 100 մլ, 200 Հայ եւ 1 մլ
3: Մեկանգամյա պիգետի խորհուրդներ
4. Մանրրոլատ ընթերցող, որը ունակ է կարդալ ներծծողությունը 450NM- ում:
5: Ներծծող թուղթ
6. Գրաֆիկական թուղթ
7. Vortex խառնիչ կամ համարժեք
【Նմուշի հավաքում եւ պահեստավորում】
1. K2-Edta պարունակող խողովակների մեջ հավաքված շիճուկ եւ պլազմային նմուշներ կարող են օգտագործվել այս հանդերձանքի համար:
2. Հատկությունները պետք է ծածկված լինեն եւ կարող են պահվել մինչեւ 48 ժամ `2 ° C- ում` 8 ° C- ով `նախքան փորձելը:
Ավելի երկար ժամանակ պահվող նմուշները (մինչեւ 6 ամիս) պետք է սառեցվեն միայն մեկ անգամ -20 ° C- ից առաջ `նախքան փորձարկելը:
Խուսափեք կրկնակի սառեցման ցիկլերից:
Արձանագրություն
【Ռեալտաժ պատրաստություն】
1. Բոլոր ռեակտիվները պետք է հանվեն սառնարանից եւ թույլատրեցին օգտագործել նախքան օգտագործումը սենյակային ջերմաստիճանում
(20 ° -ից 25 ° C): Օգտագործելուց անմիջապես հետո պահեք բոլոր ռեակտիվները սառնարանում:
2. Օգտագործումից առաջ բոլոր նմուշներն ու հսկիչները պետք է պտուտակավորվեն:
3: Hace2-HRP լուծույթի պատրաստում. Dilute Hace2-HRP կենտրոնացում 1: 51 նոսրացման հարաբերակցությունը նոսրացման միջոցով
Բուֆեր: Օրինակ, նոսրացրեք 100 մլով խաղահրապարակների խտանյութ `5,0 մլ, որի 5,0 մլ նոսրացրեք բուֆերով
Պատրաստեք Hace2-HRP լուծույթ:
4: 1 × լվացքի լուծույթի պատրաստում. Նոսրացրեք 20 × լվացքի լուծույթը դեիոնացված կամ թորած ջրով `ա
1:19 ծավալի հարաբերակցությունը: Օրինակ, նոսրացրեք 20 մլ 20 × լվացքի լուծույթ, 380 մլ դեիոնացված կամ
Թորած ջուր `400 մլ 1 × լվացքի լուծույթ պատրաստելու համար:
【Թեստի կարգը】
1. Առանձնացված խողովակների մեջ պատրաստված Hace2-HRP լուծույթի 120-ական լուծույթ:
2. Ավելացնել յուրաքանչյուր խողովակի մեջ անհայտ նմուշներ, անհայտ նմուշներ, որակի հսկողություն եւ լավ խառնել:
3: 2-րդ քայլում պատրաստված յուրաքանչյուր խառնուրդի փոխանցում `համապատասխան միկրոհամակարգիչ հորերի համապատասխան
նախանշել թեստային կազմաձեւումը:
3. Ծածկեք ափսեը ափսեի կնքմամբ եւ 30 րոպե 30 րոպեով ինկուբատով:
4. Հեռացրեք ափսեի կնքիչը եւ լվացեք ափսեը մոտավորապես 300 մկլ 1 × լվացքի լուծույթով `մեկ ջրհորի համար չորս անգամ:
5. Թակել ափսեը թղթի սրբիչով `ջրհորների մնացորդային հեղուկը լվանալու քայլերից հեռացնելու համար:
6. Յուրաքանչյուր ջրհորի համար ավելացնել 100 մկն TMB լուծույթ եւ 20 րոպե տեւողությամբ դնել ափսեը 20 րոպե:
7. Յուրաքանչյուր ջրհորի 50 մկլ դադարեցման լուծում ավելացրեք արձագանքը դադարեցնելու համար:
8. Կարդացեք ներծծումը միկրոհամայնքային ընթերցողի մեջ `450 նմ-ով` 10 րոպեի ընթացքում (630nm, որպես լրասարք
առաջարկվում է ավելի բարձր ճշգրտության կատարման համար):