Kit Deteksi Antibodi SARS-COV-COV-2 (ELISA)
【PRINSIP】
Kit Deteksi Antibodi SARS-COV-2 yang menetralkan didasarkan pada metodologi ELISA kompetitif.
Menggunakan domain pengikat reseptor murni (RBD), protein dari protein lonjakan virus dan sel inang dan sel inang
ACE2 reseptor, tes ini dirancang untuk meniru interaksi virus-host penetral.
Kalibrator, kontrol kualitas, dan sampel serum atau plasma dicampur secara individual dalam pengenceran
Buffer yang mengandung konjugat HACE2-HRP ALUQUOTED dalam tabung kecil. Kemudian campuran ditransfer
Sumur mikro yang mengandung fragmen RBD SARS-COV-2 rekombinan yang diimobilisasi untuk fragmen RBD (RBD)
inkubasi. Selama inkubasi 30 menit, antibodi spesifik RBD di kalibrator, QC dan
Sampel akan bersaing dengan HACE2-HRP untuk mengikat spesifik RBD yang diimobilisasi di sumur. Setelah
Inkubasi, sumur dicuci 4 kali untuk menghilangkan konjugat HACE2-HRP yang tidak terikat. Solusi
TMB kemudian ditambahkan dan diinkubasi selama 20 menit pada suhu kamar, menghasilkan pengembangan a
warna biru. Pengembangan warna dihentikan dengan penambahan 1N HCl, dan absorbansi adalah
Diukur secara spektrofotometri pada 450 nm. Intensitas warna yang terbentuk sebanding dengan
Jumlah enzim yang ada, dan berbanding terbalik dengan jumlah standar yang diuji dengan cara yang sama.
Melalui perbandingan dengan kurva kalibrasi yang dibentuk oleh kalibrator yang disediakan, konsentrasi
Antibodi penetral dalam sampel yang tidak diketahui kemudian dihitung.
【Bahan yang dibutuhkan tetapi tidak disediakan】
1. Air suling atau deionisasi
2. Pipet Presisi: 10μl, 100μl, 200μl dan 1 mL
3. Tip Pipet sekali pakai
4. Pembaca mikro yang mampu membaca absorbansi pada 450nm.
5. Kertas penyerap
6. Kertas grafik
7. Vortex Mixer atau setara
【Koleksi dan Penyimpanan Spesimen】
1. Sampel serum dan plasma yang dikumpulkan dalam tabung yang mengandung K2-EDTA dapat digunakan untuk kit ini.
2. Spesimen harus dibatasi dan dapat disimpan hingga 48 jam pada 2 ° C - 8 ° C sebelum pengujian.
Spesimen yang diadakan untuk waktu yang lebih lama (hingga 6 bulan) harus dibekukan hanya sekali pada -20 ° C sebelum pengujian.
Hindari siklus cairan beku berulang.
PROTOKOL
【Persiapan reagen】
1. Semua reagen harus dikeluarkan dari pendinginan dan dibiarkan kembali ke suhu kamar sebelum digunakan
(20 ° hingga 25 ° C). Simpan semua reagen di lemari es segera setelah digunakan.
2. Semua sampel dan kontrol harus vortex sebelum digunakan.
3. Persiapan larutan HACE2-HRP: Konsentrat HACE2-HRP encer pada rasio pengenceran 1: 51 dengan pengenceran dengan pengenceran
Penyangga. Misalnya, encerkan 100 μl konsentrat HACE2-HRP dengan 5.0ml buffer pengenceran HRP ke
Buat solusi HACE2-HRP.
4. 1 × persiapan larutan cuci: encerkan larutan 20 × cuci dengan air deionisasi atau suling dengan a
Rasio volume 1:19. Misalnya, encerkan 20 mL larutan cuci 20 × dengan 380 mL deionisasi atau
Air suling untuk menghasilkan 400 mL larutan cuci 1 ×.
【Prosedur Uji】
1. Dalam tabung terpisah, alikuot 120μl dari solusi HACE2-HRP yang disiapkan.
2. Tambahkan 6 μl kalibrator, sampel yang tidak diketahui, kontrol kualitas di setiap tabung dan aduk rata.
3. Transfer 100μl dari masing -masing campuran yang disiapkan dalam langkah 2 ke dalam sumur lempeng lemparan yang sesuai menurut
untuk konfigurasi tes yang telah dirancang sebelumnya.
3. Tutup pelat dengan pelat sealer dan inkubasi pada suhu 37 ° C selama 30 menit.
4. Lepaskan pelat sealer dan cuci pelat dengan sekitar 300 μl larutan cuci 1 × per sumur empat kali.
5. Ketuk pelat di atas handuk kertas untuk menghilangkan sisa cairan di sumur setelah mencuci tangga.
6. Tambahkan 100 μl larutan TMB ke masing -masing sumur dan inkubasi pelat dalam gelap pada 20 - 25 ° C selama 20 menit.
7. Tambahkan 50 μl larutan berhenti untuk setiap sumur untuk menghentikan reaksi.
8. Baca absorbansi dalam pembaca mikro pada 450 nm dalam 10 menit (630nm sebagai aksesori
direkomendasikan untuk kinerja presisi yang lebih tinggi).