Kit Deteksi Antibodi Penetralisir SARS-CoV-2 (ELISA) Testsealabs
【PRINSIP】
Kit Deteksi Antibodi Netralisasi SARS-CoV-2 didasarkan pada metodologi ELISA kompetitif.
Menggunakan domain pengikat reseptor (RBD) yang dimurnikan, protein dari protein lonjakan virus (S) dan sel inang
reseptor ACE2, tes ini dirancang untuk meniru interaksi penetralan virus-inang.
Kalibrator, Kontrol Kualitas, dan sampel serum atau plasma dicampur dengan baik secara individual dalam pengenceran
buffer yang mengandung konjugat hACE2-HRP dialiquot dalam tabung-tabung kecil. Kemudian campuran-campuran tersebut dipindahkan ke dalam
sumur mikroplat yang berisi fragmen RBD SARS-CoV-2 rekombinan yang diimobilisasi (RBD) untuk
inkubasi. Selama inkubasi 30 menit, antibodi spesifik RBD dalam kalibrator, QC dan
sampel akan bersaing dengan hACE2-HRP untuk pengikatan spesifik RBD yang diimobilisasi di dalam sumur. Setelah
inkubasi, sumur dicuci 4 kali untuk menghilangkan konjugat hACE2-HRP yang tidak terikat. Larutan
TMB kemudian ditambahkan dan diinkubasi selama 20 menit pada suhu ruangan, sehingga menghasilkan perkembangan
warna biru. Perkembangan warna dihentikan dengan penambahan HCl 1N, dan absorbansinya
diukur secara spektrofotometri pada 450 nm. Intensitas warna yang terbentuk sebanding dengan
jumlah enzim yang ada, dan berbanding terbalik dengan jumlah standar yang diuji dengan cara yang sama.
Melalui perbandingan dengan kurva kalibrasi yang dibentuk oleh kalibrator yang disediakan, konsentrasi
antibodi penetralisir dalam sampel yang tidak diketahui kemudian dihitung.
【BAHAN YANG DIPERLUKAN TAPI TIDAK DISEDIAKAN】
1. Air suling atau air deionisasi
2. Pipet presisi: 10μL, 100μL, 200μL dan 1 mL
3. Ujung pipet sekali pakai
4. Pembaca mikroplat yang mampu membaca absorbansi pada 450nm.
5. Kertas penyerap
6. Kertas grafik
7. Mixer pusaran atau setara
【PENGUMPULAN DAN PENYIMPANAN SPESIMEN】
1. Sampel serum dan plasma yang dikumpulkan dalam tabung berisi K2-EDTA dapat digunakan untuk kit ini.
2. Spesimen harus ditutup dan dapat disimpan hingga 48 jam pada suhu 2 °C - 8 °C sebelum pengujian.
Spesimen yang disimpan dalam jangka waktu lama (hingga 6 bulan) sebaiknya dibekukan hanya satu kali pada suhu -20 °C sebelum pengujian.
Hindari siklus beku-cair yang berulang.
PROTOKOL
【Persiapan Reagen】
1. Semua reagen harus dikeluarkan dari lemari pendingin dan dibiarkan kembali ke suhu ruangan sebelum digunakan
(20° hingga 25°C). Simpan semua reagen di lemari es segera setelah digunakan.
2. Semua sampel dan kontrol harus diaduk sebelum digunakan.
3. Persiapan Larutan hACE2-HRP: Encerkan konsentrat hACE2-HRP dengan rasio pengenceran 1:51 dengan Pengenceran
Penyangga. Misalnya, encerkan 100 μL konsentrat hACE2-HRP dengan 5,0 mL Penyangga Pengenceran HRP untuk
membuat larutan hACE2-HRP.
4. Persiapan Larutan Pencuci 1×: Encerkan Larutan Pencuci 20× dengan air deionisasi atau air suling dengan
rasio volume 1:19. Misalnya, encerkan 20 mL Larutan Cuci 20× dengan 380 mL larutan deionisasi atau
air suling untuk membuat 400 mL Larutan Pencuci 1×.
【Prosedur Pengujian】
1. Dalam tabung terpisah, alikuot 120μL Larutan hACE2-HRP yang telah disiapkan.
2. Tambahkan 6 μL kalibrator, sampel yang tidak diketahui, kontrol kualitas di setiap tabung dan aduk rata.
3. Pindahkan 100μL masing-masing campuran yang disiapkan pada langkah 2 ke dalam sumur mikroplat yang sesuai
untuk konfigurasi pengujian yang telah dirancang sebelumnya.
3. Tutupi pelat dengan Plate Sealer dan inkubasi pada suhu 37°C selama 30 menit.
4. Lepaskan Plate Sealer dan cuci pelat dengan sekitar 300 μL 1× Wash Solution per sumur selama empat kali.
5. Ketuk pelat pada tisu untuk menghilangkan sisa cairan dalam sumur setelah langkah pencucian.
6. Tambahkan 100 μL Larutan TMB ke setiap sumur dan inkubasi pelat dalam keadaan gelap pada suhu 20 - 25°C selama 20 menit.
7. Tambahkan 50 μL Stop Solution ke setiap sumur untuk menghentikan reaksi.
8. Baca absorbansi pada pembaca mikroplat pada 450 nm dalam waktu 10 menit (630 nm sebagai aksesori).
direkomendasikan untuk kinerja presisi yang lebih tinggi).

