ערכת גילוי נוגדנים לנטרול SARS-CoV-2 (ELISA) של Testsealabs
תיאור קצר:
קלטת בדיקת הנוגדנים המנטרלים SARS-CoV-2 היא בדיקה אימונוכרומטוגרפית מהירה. בדיקה זו מיועדת לגילוי איכותני של נוגדנים מנטרלים כנגד מחלת הקורונה 2019. ניתן להשתמש בה עם דגימות דם מלא, סרום או פלזמה אנושיות. הבדיקה משמשת ככלי עזר בהערכת רמות טיטר הנוגדנים המנטרלים כנגד נגיף הקורונה החדש בבני אדם.
 תוצאות מהירות: מדויקות במעבדה תוך דקות | דיוק ברמת מעבדה: אמין ואמין |
| בדיקה בכל מקום: אין צורך בביקור במעבדה | איכות מוסמכת: 13485, CE, תאימות Mdsap |
| פשוט ויעיל: קל לשימוש, ללא טרחה | נוחות מרבית: בדיקה בנוחות בבית |
【עִקָרוֹן】
ערכת גילוי נוגדנים מנטרלים ל-SARS-CoV-2 מבוססת על מתודולוגיית ELISA תחרותית.
באמצעות דומיין קישור קולטן מטוהר (RBD), חלבון מחלבון ספייק הוויראלי (S) ותא המארח
קולטן ACE2, בדיקה זו נועדה לחקות את האינטראקציה מנטרלת בין נגיף למארח.
כיילים, בקרות איכות ודגימות סרום או פלזמה מעורבבים היטב בנפרד בדילול
בופר המכיל קוניוגט hACE2-HRP מחולק במבחנות קטנות. לאחר מכן התערובות מועברות ל
בארות המיקרו-פלטה המכילות מקטע RBD רקומביננטי מקובע של SARS-CoV-2 (RBD) עבור
דגירה. במהלך הדגירה של 30 דקות, הנוגדן הספציפי ל-RBD בכיילים, בקרת האיכות ו
הדגימות יתחרו עם hACE2-HRP על קישור ספציפי ל-RBD המקובע בבורות. לאחר מכן
במהלך הדגירה, הבארות נשטפות 4 פעמים כדי להסיר את הצמדה הלא קשורה של hACE2-HRP. תמיסה של
לאחר מכן מוסיפים TMB ומודגרים במשך 20 דקות בטמפרטורת החדר, וכתוצאה מכך נוצרת
צבע כחול. התפתחות הצבע נעצרת עם הוספת 1N HCl, והספיגה היא
נמדד ספקטרופוטומטרית ב-450 ננומטר. עוצמת הצבע שנוצר היא פרופורציונלית ל
כמות האנזים הקיימת, והיא ביחס הפוך לכמות הסטנדרטים שנבדקו באותו אופן.
באמצעות השוואה עם עקומת הכיול שנוצרה על ידי המכיילים המסופקים, ריכוז
לאחר מכן מחושבים נוגדנים מנטרלים בדגימה הלא ידועה.
【חומרים נדרשים אך לא סופקו】
1. מים מזוקקים או מים ללא יוניזציה
2. פיפטות מדויקות: 10 מיקרוליטר, 100 מיקרוליטר, 200 מיקרוליטר ו-1 מ"ל
3. קצוות פיפטה חד פעמיים
4. קורא מיקרופלטות המסוגל לקרוא ספיגה ב-450 ננומטר.
5. נייר סופג
6. נייר גרפי
7. מערבל וורטקס או שווה ערך
【איסוף ואחסון דגימות】
1. ניתן להשתמש בערכה זו בדגימות סרום ופלזמה שנאספו במבחנות המכילות K2-EDTA.
2. יש לסגור את הדגימות וניתן לאחסן אותן עד 48 שעות בטמפרטורה של 2 מעלות צלזיוס עד 8 מעלות צלזיוס לפני הבדיקה.
יש להקפיא דגימות המוחזקות למשך זמן ארוך יותר (עד 6 חודשים) פעם אחת בלבד בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס לפני הבדיקה.
הימנעו ממחזורי הקפאה-הפשרה חוזרים ונשנים.
פּרוֹטוֹקוֹל
【הכנת ריאגנט】
1. יש להוציא את כל הריאגנטים מהקירור ולאפשר להם לחזור לטמפרטורת החדר לפני השימוש.
(20° עד 25°C). יש לשמור את כל הריאגנטים במקרר מיד לאחר השימוש.
2. יש לערבב את כל הדגימות והבקרות בוורטקס לפני השימוש.
3. הכנת תמיסת hACE2-HRP: יש לדלל את תרכיז hACE2-HRP ביחס דילול של 1:51 עם דילול.
בופר. לדוגמה, יש לדלל 100 מיקרוליטר של תרכיז hACE2-HRP עם 5.0 מ"ל של בופר דילול HRP עד
הכינו תמיסת hACE2-HRP.
4. הכנת תמיסת שטיפה 1×: יש לדלל את תמיסת השטיפה 20× במים מזוקקים או מזוקקים.
יחס נפח של 1:19. לדוגמה, יש לדלל 20 מ"ל של תמיסת שטיפה 20× עם 380 מ"ל של נוזל מזוקק או נוזל מזוקק.
מים מזוקקים להכנת 400 מ"ל של תמיסת שטיפה 1×.
【נוהל בדיקה】
1. במבחנות נפרדות, יש ליטול 120 מיקרוליטר של תמיסת hACE2-HRP שהוכנה.
2. הוסיפו 6 מיקרוליטר של כיילים, דגימות לא ידועות ובקרות איכות לכל מבחנה וערבבו היטב.
3. העבירו 100 מיקרוליטר מכל תערובת שהוכנה בשלב 2 לתוך בארות המיקרופלטה המתאימות בהתאם
לתצורת בדיקה שתוכננה מראש.
3. כסו את הצלחת באוטם צלחות ודגרו ב-37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות.
4. הסר את אוטם הפלטה ושטוף את הפלטה עם כ-300 מיקרוליטר של תמיסת שטיפה 1× לכל באר ארבע פעמים.
5. הקישו את הצלחת על מגבת נייר כדי להסיר נוזלים שיוריים מהבורות לאחר שלבי השטיפה.
6. הוסיפו 100 מיקרוליטר של תמיסת TMB לכל באר ודגרו את הצלחת בחושך בטמפרטורה של 20-25 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות.
7. הוסיפו 50 מיקרוליטר של תמיסת עצירה לכל באר כדי לעצור את התגובה.
8. קרא את הספיגה בקורא מיקרופלטות ב-450 ננומטר תוך 10 דקות (630 ננומטר כאביזר הוא
מומלץ לביצועים מדויקים יותר).