Testsealabs SARS-CoV-2-ის ნეიტრალიზების საწინააღმდეგო ანტისხეულების დეტექციის ნაკრები (ELISA)
მოკლე აღწერა:
SARS-CoV-2-ის ნეიტრალიზებადი ანტისხეულების სატესტო კასეტა არის სწრაფი ქრომატოგრაფიული იმუნოანალიზი. ეს ანალიზი შექმნილია კორონავირუსის დაავადების 2019 წლის საწინააღმდეგო ნეიტრალიზებადი ანტისხეულების თვისებრივი გამოვლენისთვის. მისი გამოყენება შესაძლებელია ადამიანის მთლიანი სისხლის, შრატის ან პლაზმის ნიმუშებზე. ტესტი ხელს უწყობს ადამიანის ახალი კორონავირუსის საწინააღმდეგო ნეიტრალიზებადი ანტისხეულების ტიტრების დონის შეფასებას.
 სწრაფი შედეგები: ლაბორატორიულად ზუსტი წუთებში | ლაბორატორიული დონის სიზუსტე: სანდო და სანდო |
| ტესტირება ნებისმიერ ადგილას: ლაბორატორიაში ვიზიტი საჭირო არ არის | სერტიფიცირებული ხარისხი: 13485, CE, Mdsap-თან თავსებადი |
| მარტივი და გამარტივებული: მარტივი გამოსაყენებელი, უპრობლემო | მაქსიმალური კომფორტი: ტესტირება კომფორტულად სახლში |
【პრინციპი】
SARS-CoV-2-ის ნეიტრალიზების საწინააღმდეგო ანტისხეულების დეტექციის ნაკრები კონკურენტულ ELISA მეთოდოლოგიას ეფუძნება.
გაწმენდილი რეცეპტორ-შემაკავშირებელი დომენის (RBD), ვირუსული სპაიკის (S) ცილისა და მასპინძელი უჯრედის ცილის გამოყენებით
ACE2 რეცეპტორის გამოყენებით, ეს ტესტი შექმნილია ვირუსისა და მასპინძელის ნეიტრალიზების ურთიერთქმედების იმიტაციისთვის.
კალიბრატორები, ხარისხის კონტროლი და შრატის ან პლაზმის ნიმუშები ინდივიდუალურად კარგად არის შერეული განზავების დროს.
hACE2-HRP კონიუგატის შემცველი ბუფერი, რომელიც ალიკვოტირებულია პატარა მილებში. შემდეგ ნარევები გადადის
მიკროფირფიტის ჭები, რომლებიც შეიცავს იმობილიზებული რეკომბინანტული SARS-CoV-2 RBD ფრაგმენტის (RBD)
ინკუბაცია. 30-წუთიანი ინკუბაციის დროს, კალიბრატორებში RBD-სპეციფიკური ანტისხეული, QC და
ნიმუშები კონკურენციას გაუწევენ hACE2-HRP-ს სპეციფიკური შეკავშირებისთვის, რომელსაც RBD იმობილიზებული აქვს ჭებში.
ინკუბაციის შემდეგ, ჭები 4-ჯერ ირეცხება შეუკავშირებელი hACE2-HRP კონიუგატის მოსაშორებლად. ხსნარი
შემდეგ ემატება TMB და ინკუბირდება 20 წუთის განმავლობაში ოთახის ტემპერატურაზე, რაც იწვევს
ლურჯი ფერი. ფერის განვითარება წყდება 1N HCl-ის დამატებით და შთანთქმა მცირდება.
სპექტროფოტომეტრიულად იზომება 450 ნმ-ზე. წარმოქმნილი ფერის ინტენსივობა პროპორციულია
არსებული ფერმენტის რაოდენობაა და უკუპროპორციულია იმავე გზით შეფასებული სტანდარტების რაოდენობასთან.
მოწოდებული კალიბრატორების მიერ შექმნილ კალიბრაციის მრუდთან შედარებით, კონცენტრაცია
შემდეგ გამოითვლება უცნობ ნიმუშში ნეიტრალიზების საწინააღმდეგო ანტისხეულების რაოდენობა.
【საჭირო, მაგრამ მიუწოდებელი მასალები】
1. გამოხდილი ან დეიონიზებული წყალი
2. ზუსტი პიპეტები: 10μL, 100μL, 200μL და 1 მლ
3. ერთჯერადი პიპეტის წვერები
4. მიკროფირფიტების წამკითხველი, რომელსაც შეუძლია 450 ნმ-ზე აბსორბციის წაკითხვა.
5. შთამნთქმელი ქაღალდი
6. გრაფიკული ქაღალდი
7. ვორტექს მიქსერი ან მისი ეკვივალენტი
【ნიმუშების შეგროვება და შენახვა】
1. ამ კომპლექტისთვის შეიძლება გამოყენებულ იქნას K2-EDTA შემცველ მილებში შეგროვებული შრატისა და პლაზმის ნიმუშები.
2. ნიმუშები უნდა იყოს დახურული და მათი შენახვა შესაძლებელია 48 საათამდე 2°C - 8°C ტემპერატურაზე ანალიზის ჩატარებამდე.
უფრო ხანგრძლივი პერიოდის განმავლობაში (6 თვემდე) შენახული ნიმუშები ანალიზის ჩატარებამდე მხოლოდ ერთხელ უნდა გაიყინოს -20°C ტემპერატურაზე.
მოერიდეთ განმეორებით გაყინვა-დათბობის ციკლებს.
პროტოკოლი
【რეაგენტის მომზადება】
1. ყველა რეაგენტი გამოყენებამდე უნდა გამოიტანოთ მაცივრიდან და ოთახის ტემპერატურაზე დაბრუნდეს.
(20°-დან 25°C-მდე). ყველა რეაგენტი გამოყენებისთანავე შეინახეთ მაცივარში.
2. გამოყენებამდე ყველა ნიმუში და კონტროლი უნდა შეირყას.
3. hACE2-HRP ხსნარის მომზადება: hACE2-HRP კონცენტრატი გააზავეთ 1:51 განზავების თანაფარდობით განზავებით
ბუფერი. მაგალითად, გააზავეთ hACE2-HRP კონცენტრატის 100 μL HRP განზავების ბუფერის 5.0 მლ-ით
hACE2-HRP ხსნარის მომზადება.
4. 1× გამრეცხი ხსნარის მომზადება: გააზავეთ 20× გამრეცხი ხსნარი დეიონიზებულ ან გამოხდილ წყალში
მოცულობითი თანაფარდობა 1:19. მაგალითად, 20× სარეცხი ხსნარის 20 მლ გააზავეთ 380 მლ დეიონიზებულ ან
გამოხდილი წყალი 400 მლ 1× სარეცხ ხსნარში მოსამზადებლად.
【ტესტირების პროცედურა】
1. ცალკეულ მილებში გადაიტანეთ მომზადებული hACE2-HRP ხსნარის 120 მკლ ალიკვოტი.
2. თითოეულ მილში დაამატეთ 6 μL კალიბრატორი, უცნობი ნიმუშები, ხარისხის კონტროლი და კარგად აურიეთ.
3. მე-2 ეტაპზე მომზადებული თითოეული ნარევის 100 მკლ გადაიტანეთ შესაბამის მიკროფირფიტის ჭებში, შესაბამისად
წინასწარ შემუშავებული ტესტის კონფიგურაციისთვის.
3. დააფარეთ ფირფიტას დამცავი ცელოფანი და ინკუბაცია მოახდინეთ 37°C ტემპერატურაზე 30 წუთის განმავლობაში.
4. ამოიღეთ ფირფიტის დამცავი და ოთხჯერ გარეცხეთ ფირფიტა დაახლოებით 300 μL 1× სარეცხ ხსნარში თითო ჭაში.
5. გარეცხვის ნაბიჯების შემდეგ ფირფიტა ქაღალდის ხელსახოცზე დააკაკუნეთ, რათა ჭაბურღილებიდან დარჩენილი სითხე მოაშოროთ.
6. თითოეულ ჭაში დაამატეთ 100 μL TMB ხსნარი და ფირფიტა 20 წუთის განმავლობაში ბნელ ადგილას, 20-25°C ტემპერატურაზე ინკუბაცია მოახდინეთ.
7. რეაქციის შესაჩერებლად თითოეულ ჭაში დაამატეთ 50 μL შემაჩერებელი ხსნარი.
8. წაიკითხეთ აბსორბცია მიკროფირფიტის წამკითხველში 450 ნმ-ზე 10 წუთის განმავლობაში (630 ნმ, როგორც დამატებითი მოწყობილობა)
რეკომენდებულია უფრო მაღალი სიზუსტის შესრულებისთვის).