SARS-COV-2 중화 항체 검출 키트 (ELISA)
【원칙】
SARS-COV-2 중화 항체 검출 키트는 경쟁력있는 ELISA 방법론을 기반으로합니다.
정제 수용체 결합 도메인 (RBD), 바이러스 스파이크 (S) 단백질 및 숙주 세포로부터의 단백질을 사용하여
수용체 ACE2,이 테스트는 바이러스-주택 중화 상호 작용을 모방하도록 설계되었습니다.
교정기, 품질 관리 및 혈청 또는 혈장 샘플은 희석 상태에서 개별적으로 잘 혼합됩니다.
작은 튜브에 분취 된 HACE2-HRP 컨쥬 게이트를 함유하는 완충액. 그런 다음 혼합물이 전달됩니다
고정화 된 재조합 SARS-COV-2 RBD 단편 (RBD)을 함유하는 마이크로 플레이트 웰.
잠복. 30 분 인큐베이션 동안, 교정기 QC의 RBD 특이 적 항체는
샘플은 웰에 고정화 된 RBD를 특이 적 바인딩하기 위해 HACE2-HRP와 경쟁합니다. 후에
인큐베이션, 웰을 4 번 세척하여 결합되지 않은 HACE2-HRP 컨쥬 게이트를 제거한다. 의 해결책
이어서 TMB를 첨가하고 실온에서 20 분 동안 인큐베이션하여
푸른 색. 1N HCl을 추가하여 색상 개발이 중지되고 흡광도는 다음과 같습니다.
450 nm에서 분광 광도계 측정. 형성된 색상의 강도는
효소의 양은 존재하며, 같은 방식으로 분석 된 표준의 양과 반비례합니다.
제공된 교정기에 의해 형성된 교정 곡선과 비교하여
이어서 미지의 샘플에서 중화 항체를 계산한다.
【필수이지만 제공되지는 않습니다】
1. 증류 또는 탈 이온수
2. 정밀 피펫 : 10μL, 100μL, 200μL 및 1 mL
3. 일회용 피펫 팁
4. 450nm에서 흡광도를 읽을 수있는 미세 배위 독자.
5. 흡수제 종이
6. 그래프 용지
7. 와류 믹서 또는 이와 동등한
【시편 수집 및 보관】
1. K2-EDTA를 함유 한 튜브에서 수집 된 혈청 및 혈장 샘플은이 키트에 사용될 수 있습니다.
2. 시편은 캡핑되어야하며 분석 전에 2 ° C -8 ° C에서 최대 48 시간 동안 저장 될 수 있습니다.
더 긴 시간 (최대 6 개월) 동안 보유 된 시편은 분석 전에 -20 ℃에서 한 번만 동결되어야한다.
반복적 인 동결-해동 사이클을 피하십시오.
규약
【시약 준비】
1. 모든 시약은 냉장에서 꺼내고 사용하기 전에 실온으로 돌아와야합니다.
(20 ° ~ 25 ° C). 사용 후 모든 시약을 냉장고에 즉시 저장하십시오.
2. 사용하기 전에 모든 샘플과 대조군은 와류가 있어야합니다.
3. HACE2-HRP 용액 제조 : 희석제 2-HRP 농축액 1 : 51 희석 비율로 희석 비율로 농축액
완충기. 예를 들어, 5.0ml의 HRP 희석 완충액으로 100 μL의 HACE2-HRP 농축 물을 희석시킵니다.
HACE2-HRP 솔루션을 만듭니다.
4. 1 × 세척 용액 제조 : 탈 이온 또는 증류수로 20x 세척 용액을
1:19의 볼륨 비율. 예를 들어, 380 ml의 탈 이온화 또는
증류 된 물을하여 400 ml의 1 × 세척 용액을 생성합니다.
【테스트 절차】
1. 별도의 튜브에서, 제조 된 HACE2-HRP 용액의 분취 량 120μL.
2. 각 튜브에 6 μL의 캘리브레이터, 알 수없는 샘플, 품질 관리를 첨가하고 잘 섞는다.
3. 2 단계에서 제조 된 각 혼합물의 100μl를 상응하는 미세 플레이트 웰에 옮깁니다.
미리 설계된 테스트 구성.
3. 플레이트 실러로 플레이트를 덮고 37 ℃에서 30 분 동안 배양합니다.
4. 플레이트 실러를 제거하고 웰에 따라 약 300 μl의 1 × 세척 용액으로 플레이트를 4 번 씻으십시오.
5. 종이 타월의 플레이트를 탭하여 세척 후 웰에서 잔류 액체를 제거하십시오.
6. 각 웰에 100 μl의 TMB 용액을 첨가하고 20-25 ℃에서 20 분 동안 플레이트를 어두운 곳에서 배양합니다.
7. 반응을 막기 위해 각 웰에 50 μl의 정지 용액을 첨가하십시오.
8. 10 분 이내에 450 nm에서 마이크로 플레이트 리더의 흡광도를 읽으십시오 (액세서리로서 630nm.
더 높은 정밀 성능을 위해 권장).