Testsealabs Kîta Tesbîtkirina Antîkorê ya Bêbandorkirina SARS-CoV-2 (ELISA)
【RÊZMAN】
Kîta Tesbîtkirina Antîkorê Bêbandorker a SARS-CoV-2 li ser bingeha rêbaza ELISA ya reqabetê ye.
Bi karanîna domaina girêdana reseptorê ya paqijkirî (RBD), proteîna ji proteîna spike vîrus (S) û şaneya mêvandar
reseptora ACE2, ev test ji bo teqlîdkirina têkiliya bêbandorkirina vîrus-mêvandar hatiye çêkirin.
Kalîbrator, Kontrolên Kalîteyê, û nimûneyên serum an plazmayê di şilkirinê de bi awayekî ferdî baş têne tevlihevkirin.
tamponek ku tê de konjugata hACE2-HRP heye di lûleyên piçûk de tê dabeşkirin. Piştre tevlihevî têne veguheztin nav
bîrên mîkroplateyê yên ku perçeya RBD ya SARS-CoV-2 RBD ya rekombinant a bêbandorkirî (RBD) dihewînin ji bo
înkubasyonê. Di dema înkubasyonê ya 30-deqeyî de, antîkorê taybetî yê RBD di kalîbratoran, QC û
Nimûne dê ji bo girêdana taybetî ya ku RBD di qulikan de hatiye sabîtkirin bi hACE2-HRP re pêşbaziyê bikin. Piştî
di înkubasyonê de, bîr 4 caran têne şuştin da ku konjugata hACE2-HRP ya negirêdayî were rakirin. Çareseriya
Dû re TMB tê zêdekirin û 20 deqîqeyan li germahiya odeyê tê înkubasyonkirin, di encamê de dibe sedema pêşketina
rengê şîn. Pêşketina reng bi lêzêdekirina 1N HCl tê rawestandin, û vegirtinê kêm dibe.
bi awayekî spektrofotometrîkî di 450 nm de hatiye pîvandin. Şîddeta rengê çêbûyî bi rêjeyî ye
mîqdara enzîma heyî ye, û bi awayekî berevajî bi mîqdara standardên ku bi heman awayî têne ceribandin ve girêdayî ye.
Bi rêya berawirdkirinê bi xêza kalibrasyonê ya ku ji hêla kalibratorên peyda kirî ve hatî çêkirin, rêjeya
dû re antîkorên bêbandorker di nimûneya nenas de têne hesibandin.
【MATERYALÊN PÊWÎST LÊ NEHATINE PÊŞKÊŞKIRIN】
1. Ava distilkirî an jî deîyonîzekirî
2. Pîpetên rastbûn: 10μL, 100μL, 200μL û 1 mL
3. Serên pîpetê yên yekcar bikarhatî
4. Xwendevanê mîkroplateyê ku dikare vegirtinê li 450nm bixwîne.
5. Kaxeza mijandinê
6. Kaxeza grafîkî
7. Miksera Vortex an jî hevwateya wê
【BERHEVKIRIN Û HILGIRTINA NIMÛNEYAN】
1. Nimûneyên serum û plazmayê yên ku di lûleyên ku K2-EDTA tê de hene de hatine berhevkirin dikarin ji bo vê kîtê werin bikar anîn.
٢. Divê nimûne werin qapaxkirin û heta ٤٨ saetan berî ceribandinê dikarin di navbera ٢°C - ٨°C de werin hilanîn.
Nimûneyên ku ji bo demek dirêjtir (heta 6 mehan) têne hilanîn, divê tenê carekê berî ceribandinê li -20°C werin cemidandin.
Ji çerxên dubarekirî yên cemidandin-helandinê dûr bisekinin.
PROTOKOL
【Amadekirina Reaktîfê】
1. Divê hemû reagents berî bikaranînê ji sarincê werin derxistin û werin hiştin ku vegerin germahiya odeyê.
(20° heta 25°C). Piştî bikaranînê hemû reagentan di cih de di sarincê de hilînin.
٢. Divê hemû nimûne û kontrol berî bikaranînê werin tevlihevkirin.
3. Amadekirina Çareseriya hACE2-HRP: Konsantreya hACE2-HRP bi rêjeya 1:51 bi Dilutionê ve tevlîhev bikin.
Tampon. Bo nimûne, 100 μL konsantreya hACE2-HRP bi 5.0 mL Tampona Dilution HRP ve bihelînin da ku
çareseriya hACE2-HRP çêkin.
4. Amadekirina Çareseriya Şuştinê ya 1×: Çareseriya Şuştinê ya 20× bi ava deîyonîzekirî an jî distilkirî bi ava
rêjeya qebareyê 1:19 e. Bo nimûne, 20 mL ji Çareseriya Şuştinê ya 20× bi 380 mL ji deîyonîzekirî an
ava distilkirî bikar bînin da ku 400 mL çareseriya şuştinê ya 1× çêbikin.
【Prosedûra Testê】
1. Di lûleyên cuda de, 120µL ji çareseriya hACE2-HRP ya amadekirî parçe bikin.
2. 6 μL kalibrator, nimûneyên nenas, û kontrolên kalîteyê li her lûleyê zêde bikin û baş tevlihev bikin.
3. 100 μL ji her têkelê ku di gava 2-an de hatiye amadekirin, li gorî pîvanên mîkroplateyê veguhezînin nav qulên mîkroplateyê yên têkildar.
bo konfigurasyona testê ya pêş-dîzaynkirî.
3. Plakê bi Plate Sealer veşêrin û di 37°C de bo 30 deqeyan înkubasyonê bikin.
4. Morkera Plaqeyê derxînin û plakeyê bi qasî 300 μL ji Çareseriya Şuştinê ya 1× ji bo her qulikê çar caran bişon.
5. Piştî gavên şuştinê, ji bo rakirina şileya mayî ya di qulikan de, plakayê li ser destmala kaxizî bitewînin.
6. 100 μL çareseriya TMB li her qulikê zêde bikin û plakayê di tariyê de di 20-25°C de bo 20 deqîqeyan înkubasyonê bikin.
7. Ji bo rawestandina reaksiyonê, 50 μL ji Çareseriya Stop li her qulikê zêde bikin.
٨. Di nav ١٠ xulekan de (630nm wekî aksesûar) di xwendevana mîkropelê de li ٤٥٠ nm pîvana vegirtinê bixwîne.
ji bo performansa rastbûna bilindtir tê pêşniyar kirin).

