Sars-COV-2 tsy miandany amin'ny Kitapo manohitra ny fanoherana (Elisa)
【TORO LALAN'NY】
Ny Kitapo tsy miangatra amin'ny SARS-COV-2 dia miankina amin'ny fomba elisa mifaninana.
Mampiasa domain famatorana (RBD) fanadiovana (RBD), proteinina avy amin'ny proteinina Spike Spike sy ny sela mpampiantrano
Mpanatanteraka Ace2, ity fitsapana ity dia natao hanakanana ny fitandremana ny virus-mpampiantrano ny fifaneraserana tsy miangatra.
Ny calibrators, ny fanaraha-maso kalitao ary ny santionany serum na ny santionany dia mifangaro tsara amin'ny fitrandrahana
Ny buffer misy ny hace2-hRP dia miovaova amin'ny fantsona kely. Avy eo dia afindra ny fifangaroana
Ny lavadrano microuptate misy sombin-javamaniry tsy mety maty-cov-2 rbd (rbd) ho an'ny
incubation. Nandritra ny fanodinana 30 minitra, ny antibd manokana rBD ao amin'ny calibrators, qc ary
Ny santionany dia hifaninana amin'ny hace2-hRP ho an'ny famatorana ny RBD tsy voafehy ao anaty lava-drano. rehefa
Ny fanodinana, ny lava-drano dia voasasa in-4 mba hanesorana ny Hace2-HRP Unbound Conjugate. Vahaolana amin'ny
Ny TMB dia ampiana ary ampidirina mandritra ny 20 minitra amin'ny mari-pana amin'ny efitrano, ka miteraka ny fivoaran'ny a
loko manga. Ny fivoaran'ny loko dia ajanony miaraka amin'ny fanampian'ny 1n hcl, ary ny fisotroana dia
refesina spectrophotometrika amin'ny 450 nm. Ny hamafin'ny loko noforonina dia mitovy amin'ny
Ny habetsaky ny angovo, ary mifandraika amin'ny habetsaky ny fenitra izay tafiditra amin'ny fomba mitovy.
Amin'ny alàlan'ny fampitahana ny curve calibration izay noforonin'ireo calibrator nomena, ny fifantohan'ny
Ny fianianana ny antibiôzia amin'ny santionany tsy fantatra dia kajy avy eo.
【Fitaovana takiana fa tsy omena】
1. Rano mihemotra na mifamadika
2. Pipira voafaritra: 10μL, 100μL, 200μL ary 1 ML
3. Torohevitra Pipette Pipette
4. Ny mpamaky mikrôleplate dia mahay mamaky teny amin'ny 450nm.
5. Taratasy fanoratana
6. Taratasy sary
7. Ny Vortex Mixer na mitovy
【Fanangonana sy fitahirizana specimen】
1. santionany serum sy plasma voangona ao anaty fantsona misy k2-edta azo ampiasaina ho an'ity kitapo ity.
2. Ny santionany dia tokony ho voafehy ary mety hotehirizina hatramin'ny 48 ora ao amin'ny 2 ° C - 8 ° C alohan'ny hidirany.
Ny santionany natao nandritra ny fotoana ela kokoa (hatramin'ny 6 volana) dia tokony hatsiaka indray mandeha amin'ny -20 ° C eo alohan'ny Assay.
Fadio ny tsingerin'ny freeze-thaw-thaw.
fifanarahana
【Fiomanana am-boninahitra】
1. Ny rantsan-kazo rehetra dia tsy maintsy esorina amin'ny vata fampangatsiahana ary avela hiverina amin'ny mari-pana amin'ny efitrano alohan'ny hampiasana azy
(20 ° ka 25 ° C). Tehirizo ny referaly rehetra ao anaty vata fampangatsiahana aorian'ny fampiasana.
2. Ny santionany sy ny fifehezana rehetra dia tokony ho voditongana alohan'ny hampiasana azy.
3. HACE2-HRP Vahaolana fanomanana: DILUTE HACE2-HRP mifantoka amin'ny 1: 51 Dilute Ratio Ratio miaraka amin'ny Dilution
Buffer. Ohatra, milomano 100 μl amin'ny hace2-hrp mifantoka amin'ny 5.0ml an'ny HRP Dilut Buffer
Manaova vahaolana Hace2-HRP.
4. 1 × Manasa vahaolana vahaolana: Manalefaka ny vahaolana 20 ×
Ratio Bolume amin'ny 1:19. Ohatra, milomano 20 ml amin'ny 20 × Manasazy vahaolana amin'ny 380 ml deionized na
rano mihamafana mba hahatonga ny vahaolana 400 ml 100 ml.
【Fomba fanandramana】
1. Amin'ny fantsona misaraka, aliquot 120μ amin'ny vahaolana Hace2-HRP voaomana.
2. Ampio 6 μl ny calibrator, santionany tsy fantatra, mifehy ny kalitao ao amin'ny fantsona tsirairay ary mifangaro tsara.
3. Taminy 100μ ny fangaro tsirairay voaomana amin'ny Dingana 2 amin'ny fantsakana microplate mifanaraka amin'ny Wells
ny fanitsiana fitsapana mialoha.
3. Sarony amin'ny setroka misy takelaka ny takelaka ary miditra ao amin'ny 37 ° C mandritra ny 30 minitra.
4. Esory ny setroka plate ary sasao ny takelaka misy ny 300 × amin'ny 1 × 11 ×.
5. Tsindrio ny takelaka eo amin'ny lamba famaohana taratasy mba hanesorana ny ranon-tsoavaly ao anaty lava-drano aorian'ny fanasan-doha.
6. Ampio ny vahaolana 100 μl amin'ny Vahoavan'ny TMB isaky ny tsara sy mampiditra ny takelaka ao anaty maizina amin'ny 20 - 25 ° C mandritra ny 20 minitra.
7. Ampio ny 50 μl amin'ny fijanonana ny vahaolana amin'ny tsara tsirairay mba hampitsaharana ny fanehoan-kevitra.
8. Vakio ny absorbance ao amin'ny mpamaky microplate amin'ny 450 NM ao anatin'ny 10 minitra (630nm raha ny fidirana
soso-kevitra ho amin'ny fampisehoana avo lenta kokoa).