Testsealabs SARS-CoV-2 neutraliserende antilichaamdetectiekit (ELISA)
Korte beschrijving:
De SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Test Cassette is een snelle chromatografische immunoassay. Deze test is ontworpen voor de kwalitatieve detectie van neutraliserende antilichamen tegen het coronavirus 2019. De test kan worden gebruikt met menselijk volbloed, serum of plasma. De test dient als hulpmiddel bij het evalueren van de titers van neutraliserende antilichamen tegen het nieuwe coronavirus bij mensen.
 Snelle resultaten: laboratoriumnauwkeurig binnen enkele minuten | Precisie van laboratoriumkwaliteit: betrouwbaar en vertrouwd |
| Test overal: geen laboratoriumbezoek vereist | Gecertificeerde kwaliteit: 13485, CE, Mdsap-compatibel |
| Eenvoudig en gestroomlijnd: gemakkelijk te gebruiken, geen gedoe | Ultiem gemak: test comfortabel thuis |
【BEGINSEL】
De SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit is gebaseerd op de competitieve ELISA-methodologie.
Met behulp van gezuiverd receptorbindingsdomein (RBD), eiwit van het virale spike (S)-eiwit en de gastheercel
receptor ACE2, is deze test ontworpen om de neutraliserende interactie tussen het virus en de gastheer na te bootsen.
Calibrators, kwaliteitscontroles en serum- of plasmamonsters worden afzonderlijk goed gemengd in verdunning
buffer met hACE2-HRP-conjugaat verdeeld in kleine buisjes. Vervolgens worden de mengsels overgebracht in
de microtiterplaatputjes die geïmmobiliseerd recombinant SARS-CoV-2 RBD-fragment (RBD) bevatten voor
incubatie. Tijdens de incubatie van 30 minuten wordt het RBD-specifieke antilichaam in de kalibrators, QC en
monsters zullen concurreren met de hACE2-HRP voor specifieke binding van de RBD die in de wells is geïmmobiliseerd. Na
Na de incubatie worden de putjes vier keer gewassen om ongebonden hACE2-HRP-conjugaat te verwijderen. Een oplossing van
Vervolgens wordt TMB toegevoegd en gedurende 20 minuten bij kamertemperatuur geïncubeerd, wat resulteert in de ontwikkeling van een
blauwe kleur. De kleurontwikkeling wordt gestopt door toevoeging van 1N HCl en de absorptie is
spectrofotometrisch gemeten bij 450 nm. De intensiteit van de gevormde kleur is evenredig met de
hoeveelheid enzym aanwezig en is omgekeerd evenredig met de hoeveelheid standaarden die op dezelfde manier worden bepaald.
Door vergelijking met de kalibratiecurve gevormd door de meegeleverde kalibrators, wordt de concentratie van
Vervolgens worden de neutraliserende antilichamen in het onbekende monster berekend.
【VEREISTE MATERIALEN, MAAR NIET GELEVERD】
1. Gedistilleerd of gedemineraliseerd water
2. Precisiepipetten: 10 μL, 100 μL, 200 μL en 1 ml
3. Wegwerppipetpunten
4. Microplate-lezer die de absorptie bij 450 nm kan meten.
5. Absorberend papier
6. Grafiekpapier
7. Vortexmixer of equivalent
【VERZAMELING EN OPSLAG VAN MONSTERS】
1. Serum- en plasmamonsters verzameld in buisjes met K2-EDTA kunnen voor deze kit worden gebruikt.
2. Monsters moeten worden afgesloten en kunnen maximaal 48 uur bij 2 °C - 8 °C worden bewaard voordat ze worden geanalyseerd.
Monsters die langer (tot 6 maanden) worden bewaard, dienen slechts één keer te worden ingevroren bij -20 °C vóór de analyse.
Vermijd herhaaldelijk vriezen en ontdooien.
PROTOCOL
【Reagensbereiding】
1. Alle reagentia moeten uit de koelkast worden gehaald en op kamertemperatuur worden gebracht voordat ze worden gebruikt.
(20° tot 25°C). Bewaar alle reagentia direct na gebruik in de koelkast.
2. Alle monsters en controles moeten vóór gebruik worden gewerveld.
3. Bereiding van de hACE2-HRP-oplossing: Verdun het hACE2-HRP-concentraat in een verdunningsverhouding van 1:51 met Verdunning
Buffer. Verdun bijvoorbeeld 100 μl hACE2-HRP-concentraat met 5,0 ml HRP-verdunningsbuffer tot
maak een hACE2-HRP-oplossing.
4. Bereiding van de 1× wasoplossing: Verdun de 20× wasoplossing met gedemineraliseerd of gedestilleerd water met een
volumeverhouding van 1:19. Verdun bijvoorbeeld 20 ml 20× wasoplossing met 380 ml gedeïoniseerd of
gedestilleerd water om 400 ml 1× wasoplossing te maken.
【Testprocedure】
1. Verdeel 120 μL van de bereide hACE2-HRP-oplossing in aparte buisjes.
2. Voeg 6 μL kalibrators, onbekende monsters en kwaliteitscontroles toe aan elk buisje en meng goed.
3. Breng 100 μL van elk in stap 2 bereid mengsel over in de overeenkomstige microtiterplaatputjes volgens
naar een vooraf ontworpen testconfiguratie.
3. Bedek de plaat met Plate Sealer en laat hem 30 minuten incuberen bij 37°C.
4. Verwijder de plaatsealer en was de plaat vier keer met ongeveer 300 μl 1× wasoplossing per well.
5. Tik het bord op een papieren handdoek om de resterende vloeistof uit de putjes te verwijderen na het wassen.
6. Voeg 100 μL TMB-oplossing toe aan elk putje en laat de plaat 20 minuten in het donker incuberen bij 20 - 25°C.
7. Voeg 50 μL stopoplossing toe aan elke well om de reactie te stoppen.
8. Lees de absorptie af in een microplate-lezer bij 450 nm binnen 10 minuten (630 nm als accessoire is
aanbevolen voor hogere precisieprestaties).