د ټیسټسیلابس SARS-CoV-2 بې طرفه کولو انټي باډي کشف کټ (ELISA)
لنډ معلومات:
د SARS-CoV-2 د انټي باډي بې طرفه کولو ټیسټ کیسیټ یو چټک کروماتګرافیک معافیتي ازموینه ده. دا ازموینه د 2019 کال د کورونویرس ناروغۍ پروړاندې د بې طرفه کولو انټي باډي کیفیتي کشف لپاره ډیزاین شوې. دا د انسان د ټولې وینې، سیرم، یا پلازما نمونو سره کارول کیدی شي. دا ازموینه د انسان د ناول کورونویرس بې طرفه کولو انټي باډي ټایټرونو د کچې ارزولو کې د مرستې په توګه کار کوي.
 چټکې پایلې: په څو دقیقو کې د لابراتوار دقیقیت | د لابراتوار درجې دقت: د باور وړ او د باور وړ |
| هر ځای ازموینه: د لابراتوار لیدنې ته اړتیا نشته | تصدیق شوی کیفیت: ۱۳۴۸۵، سي ای، ایم ډي ایس اې پي مطابقت لري |
| ساده او ساده: د کارولو لپاره اسانه، هیڅ ستونزه نشته | حتمي اسانتیا: په کور کې په آرامۍ سره ازموینه وکړئ |
【اصل】
د SARS-CoV-2 د انټي باډي بې طرفه کولو کټ د ELISA سیالۍ میتودولوژي پراساس دی.
د پاک شوي ریسیپټر بانډینګ ډومین (RBD) په کارولو سره، د ویروس سپیک (S) پروټین څخه پروټین او کوربه حجره
د ACE2 ریسیپټر، دا ازموینه د ویروس او کوربه د بې طرفه کولو تعامل تقلید کولو لپاره ډیزاین شوې ده.
کیلیبریټرونه، د کیفیت کنټرولونه، او د سیرم یا پلازما نمونې په انفرادي ډول په ښه توګه په ډیلویشن کې مخلوط کیږي.
هغه بفر چې hACE2-HRP کنجوګیټ لري په کوچنیو ټیوبونو کې جلا کیږي. بیا مخلوط په
د مایکروپلیټ څاګانې چې د غیر فعال بیا ترکیب کونکي SARS-CoV-2 RBD ټوټې (RBD) لري د
د انکیوبیشن. د 30 دقیقو انکیوبیشن په جریان کې، د RBD ځانګړي انټي باډي په کیلیبریټرونو، QC او
نمونې به د څاګانو کې د غیر فعال شوي RBD د ځانګړي تړلو لپاره د hACE2-HRP سره سیالي وکړي. وروسته
د انکیوبیشن په وخت کې، څاګانې څلور ځله مینځل کیږي ترڅو غیر تړلي hACE2-HRP کنجوګیټ لرې کړي. د محلول
بیا TMB اضافه کیږي او د خونې په تودوخه کې د 20 دقیقو لپاره اچول کیږي، چې په پایله کې د a پراختیا رامینځته کیږي
نیلي رنګ. د رنګ پراختیا د 1N HCl اضافه کولو سره ودرول کیږي، او جذب کیږي
په سپیکٹروفوټومیټریک ډول په 450 nm اندازه شوی. د جوړ شوي رنګ شدت د متناسب دی
د انزایمونو مقدار چې شتون لري، او په ورته ډول د ازمول شوي معیارونو مقدار سره معکوس تړاو لري.
د چمتو شوي کیلیبریټرونو لخوا رامینځته شوي کیلیبریشن منحني سره د پرتله کولو له لارې، د غلظت
بیا په نامعلومه نمونه کې د انټي باډي بې طرفه کول محاسبه کیږي.
【اړین توکي خو نه دي ورکړل شوي】
۱. تقطیر شوي یا غیر ایونیز شوي اوبه
۲. دقیق پایپټونه: ۱۰μL، ۱۰۰μL، ۲۰۰μL او ۱ ملی لیتر
۳. د ضایع کیدو وړ پایپټ لارښوونې
۴. مایکروپلیټ ریډر چې په ۴۵۰ نانومیټر کې د جذب لوستلو وړتیا لري.
۵. د جاذب کاغذ
۶. د ګراف کاغذ
۷. ورټیکس مکسر یا معادل
【د راټولولو او ذخیره کولو نمونه】
۱. د سیرم او پلازما نمونې چې په ټیوبونو کې راټول شوي چې K2-EDTA لري د دې کټ لپاره کارول کیدی شي.
۲. نمونې باید پوښل شي او د ارزونې دمخه تر ۲ درجو سانتی ګراد - ۸ درجو سانتی ګراد پورې تر ۴۸ ساعتونو پورې زیرمه کیدی شي.
هغه نمونې چې د اوږدې مودې لپاره ساتل کیږي (تر شپږو میاشتو پورې) باید د ارزونې دمخه یوازې یو ځل په -20 درجو سانتی ګراد کې کنګل شي.
د کنګل کولو او ویلې کیدو د تکراري دورو څخه ډډه وکړئ.
پروتوکول
【د ریجنټ چمتووالی】
۱. ټول ریجنټونه باید له یخچال څخه وباسي او د کارولو دمخه د خونې تودوخې ته بیرته راستنیدو ته اجازه ورکړل شي.
(۲۰ درجو څخه تر ۲۵ درجو سانتي ګراد پورې). د کارولو وروسته سمدلاسه ټول ریجنټونه په یخچال کې وساتئ.
۲. ټول نمونې او کنټرولونه باید د کارولو دمخه واورټیکس شي.
۳. د hACE2-HRP د محلول چمتو کول: د hACE2-HRP غلظت د ۱:۵۱ د کمولو په تناسب سره د Dilution سره کم کړئ.
بفر. د مثال په توګه، د hACE2-HRP غلظت 100 μL د 5.0mL HRP ډیلیشن بفر سره حل کړئ ترڅو
د hACE2-HRP محلول جوړ کړئ.
۴. د ۱× واش محلول چمتو کول: د ۲۰× واش محلول د ډیونیز شوي یا تقطیر شوي اوبو سره د a سره حل کړئ
د حجم تناسب ۱:۱۹. د مثال په توګه، د ۲۰× واش محلول ۲۰ ملی لیتر د ۳۸۰ ملی لیتر ډیونایز شوي یا
د ۱× واش محلول د ۴۰۰ ملی لیتر جوړولو لپاره تقطیر شوي اوبه.
【د ازموینې پروسیجر】
۱. په جلا ټیوبونو کې، د چمتو شوي hACE2-HRP محلول ۱۲۰μL په مساوي ډول واچوئ.
۲. په هر ټیوب کې ۶ μL کیلیبریټرونه، نامعلوم نمونې، د کیفیت کنټرولونه اضافه کړئ او ښه مخلوط کړئ.
۳. د هر مخلوط ۱۰۰μL چې په دوهم ګام کې چمتو شوی دی، د اړونده مایکروپلیټ څاګانو ته د مطابق سره سم انتقال کړئ.
د مخکې ډیزاین شوي ازموینې ترتیب ته.
۳. پلیټ د پلیټ سیلر سره پوښ کړئ او د ۳۰ دقیقو لپاره په ۳۷ درجو سانتی ګراد کې یې واچوئ.
۴. د پلیټ سیلر لرې کړئ او پلیټ د شاوخوا ۳۰۰ μL ۱× واش محلول سره په هر څاه کې څلور ځله ومینځئ.
۵. د مینځلو مرحلو وروسته په څاه ګانو کې د پاتې مایعاتو لرې کولو لپاره پلیټ په کاغذ تولیه باندې ټایپ کړئ.
۶. په هر څاه کې ۱۰۰ μL TMB محلول اضافه کړئ او پلیټ په تیاره کې د ۲۰ - ۲۵ درجو سانتی ګراد په تودوخه کې د ۲۰ دقیقو لپاره واچوئ.
۷. د تعامل د بندولو لپاره په هر څاه کې ۵۰ μL سټاپ محلول اضافه کړئ.
۸. په مایکروپلیټ ریډر کې د جذب کچه په ۴۵۰ نانومیټره کې په ۱۰ دقیقو کې ولولئ (۶۳۰ نانومیټره لکه څنګه چې لوازم دی)
د لوړ دقت فعالیت لپاره سپارښتنه کیږي).