ٽيسٽسيليبس SARS-CoV-2 غير جانبدار اينٽي باڊي ڳولڻ واري ڪٽ (ELISA)
مختصر وضاحت:
SARS-CoV-2 غير جانبدار اينٽي باڊي ٽيسٽ ڪيسٽ هڪ تيز ڪروميٽوگرافڪ اميوناسائي آهي. هي امتحان ڪورونا وائرس جي بيماري 2019 جي خلاف غير جانبدار اينٽي باڊيز جي معيار جي ڳولا لاءِ ٺاهيو ويو آهي. ان کي انساني پوري رت، سيرم، يا پلازما جي نمونن سان استعمال ڪري سگهجي ٿو. هي ٽيسٽ انساني اينٽي ناول ڪورونا وائرس کي غير جانبدار اينٽي باڊي ٽائيٽرز جي سطحن جو جائزو وٺڻ ۾ مدد طور ڪم ڪري ٿو.
 تيز نتيجا: منٽن ۾ ليبارٽري-درست | ليبارٽري گريڊ جي درستگي: قابل اعتماد ۽ قابل اعتماد |
| ڪٿي به ٽيسٽ ڪريو: ليبارٽري گهمڻ جي ضرورت ناهي | تصديق ٿيل معيار: 13485، سي اي، ايم ڊي ايس اي پي مطابق |
| سادو ۽ سڌريل: استعمال ۾ آسان، ڪا به پريشاني ناهي | آخري سهولت: گهر ۾ آرام سان ٽيسٽ ڪريو |
【اصول】
SARS-CoV-2 غير جانبدار اينٽي باڊي ڳولڻ وارو ڪٽ مقابلي واري ELISA طريقيڪار تي ٻڌل آهي.
صاف ٿيل ريڪٽر بائنڊنگ ڊومين (RBD)، وائرل اسپائڪ (S) پروٽين مان پروٽين ۽ ميزبان سيل استعمال ڪندي
ريڪٽر ACE2، هي ٽيسٽ وائرس-ميزبان غير جانبدار رابطي جي نقل ڪرڻ لاءِ ٺاهيو ويو آهي.
ڪيليبريٽر، ڪوالٽي ڪنٽرول، ۽ سيرم يا پلازما جا نمونا انفرادي طور تي ڊائليشن ۾ چڱي طرح ملايا ويندا آهن.
hACE2-HRP ڪنجوگيٽ تي مشتمل بفر ننڍڙن ٽيوبن ۾ الڳ ڪيو ويو آهي. پوءِ مرکب کي منتقل ڪيو ويندو آهي
مائڪروپليٽ ويلز جن ۾ متحرڪ ريڪومبيننٽ SARS-CoV-2 RBD فريگمينٽ (RBD) شامل آهن
انڪيوبيشن. 30 منٽن جي انڪيوبيشن دوران، ڪيليبريٽرز ۾ آر بي ڊي مخصوص اينٽي باڊي، QC ۽
نمونا کوهن ۾ متحرڪ RBD جي مخصوص پابند لاءِ hACE2-HRP سان مقابلو ڪندا. بعد ۾
انڪيوبيشن دوران، کوهن کي 4 ڀيرا ڌوتو ويندو آهي ته جيئن اڻ ڄاتل hACE2-HRP ڪنجوگيٽ کي هٽايو وڃي. جو هڪ حل
پوءِ ٽي ايم بي شامل ڪيو ويندو آهي ۽ ڪمري جي حرارت تي 20 منٽن لاءِ انڪيوبيٽ ڪيو ويندو آهي، جنهن جي نتيجي ۾ الف جي ترقي ٿيندي آهي
نيرو رنگ. 1N HCl جي اضافي سان رنگ جي ترقي روڪي ويندي آهي، ۽ جذب ٿيڻ
450 nm تي اسپيڪٽروفوٽوميٽرڪ طور تي ماپيو ويو. ٺهيل رنگ جي شدت متناسب آهي
موجود اينزائم جي مقدار، ۽ ساڳئي طريقي سان جانچيل معيارن جي مقدار سان الٽ لاڳاپيل آهي.
مهيا ڪيل ڪيليبريٽرز پاران ٺهيل ڪيليبريشن وکر سان مقابلي ذريعي، جي ڪنسنٽريشن
پوءِ اڻڄاتل نموني ۾ اينٽي باڊيز کي غير جانبدار ڪرڻ جو حساب لڳايو ويندو آهي.
【مواد گهربل آهن پر مهيا نه ڪيا ويا آهن】
1. ڊسٽل ٿيل يا ڊي آئنائيزڊ پاڻي
2. پريسيشن پائپٽس: 10μL، 100μL، 200μL ۽ 1 mL
3. ڊسپوزيبل پائيپٽ جا ٽوٽڪا
4. مائڪروپليٽ ريڊر 450nm تي جذب پڙهڻ جي قابل.
5. جاذب پيپر
6. گراف پيپر
7. وورٽيڪس مکسر يا برابر
【نموني گڏ ڪرڻ ۽ اسٽوريج】
1. K2-EDTA تي مشتمل ٽيوبن ۾ گڏ ڪيل سيرم ۽ پلازما جا نمونا هن ڪِٽ لاءِ استعمال ڪري سگهجن ٿا.
2. نمونن کي ڍڪيو وڃي ۽ جانچ کان اڳ 2 °C - 8 °C تي 48 ڪلاڪن تائين ذخيرو ڪري سگهجي ٿو.
وڌيڪ وقت تائين (6 مهينن تائين) رکيل نمونن کي امتحان کان اڳ صرف هڪ ڀيرو -20 °C تي منجمد ڪيو وڃي.
بار بار منجمد-پگھلڻ جي چڪر کان پاسو ڪريو.
پروٽوڪول
【ريجنٽ جي تياري】
1. سڀني ريجينٽس کي ريفريجريشن مان ڪڍيو وڃي ۽ استعمال کان اڳ ڪمري جي حرارت تي واپس اچڻ ڏنو وڃي.
(20° کان 25°C). استعمال کان پوءِ فوري طور تي سڀني ري ايجنٽس کي فرج ۾ محفوظ ڪريو.
2. استعمال کان اڳ سڀني نمونن ۽ ڪنٽرولن کي وورٽيڪس ڪيو وڃي.
3. hACE2-HRP حل جي تياري: hACE2-HRP ڪنسنٽريٽ کي 1:51 جي تناسب سان ڊائليشن سان پتلو ڪريو.
بفر. مثال طور، 100 μL hACE2-HRP ڪنسنٽريٽ کي 5.0mL HRP ڊائيليشن بفر سان ملايو ته جيئن
هڪ hACE2-HRP محلول ٺاهيو.
4. 1× واش محلول جي تياري: 20× واش محلول کي ڊيونائيزڊ يا ڊسٽل ٿيل پاڻي سان پتلي ڪريو.
حجم جو تناسب 1:19. مثال طور، 20 ايم ايل 20× واش محلول کي 380 ايم ايل ڊي آئنائيزڊ يا
1× واش محلول جو 400 ايم ايل ٺاهڻ لاءِ ڊسٽل پاڻي.
【ٽيسٽ جو طريقو】
1. الڳ الڳ ٽيوبن ۾، تيار ڪيل hACE2-HRP محلول جو 120μL aliquot ڪريو.
2. هر ٽيوب ۾ 6 μL ڪيليبريٽر، اڻڄاتل نمونا، معيار ڪنٽرول شامل ڪريو ۽ چڱي طرح ملايو.
3. مرحلي 2 ۾ تيار ڪيل هر مرکب جي 100μL کي لاڳاپيل مائڪروپليٽ ويلز ۾ منتقل ڪريو
اڳ ۾ ٺهيل ٽيسٽ ترتيب ڏيڻ لاءِ.
3. پليٽ کي پليٽ سيلر سان ڍڪيو ۽ 37°C تي 30 منٽن لاءِ انڪيوبيٽ ڪريو.
4. پليٽ سيلر کي هٽايو ۽ پليٽ کي تقريباً 300 μL 1× واش محلول سان هر کوهه تي چار ڀيرا ڌوئو.
5. ڌوئڻ جي مرحلن کان پوءِ کوهن ۾ بچيل مائع کي ڪڍڻ لاءِ پليٽ کي ڪاغذ جي تولي تي ٽيپ ڪريو.
6. هر کوهه ۾ 100 μL TMB محلول شامل ڪريو ۽ پليٽ کي اونداهي ۾ 20 - 25°C تي 20 منٽن لاءِ سيراب ڪريو.
7. رد عمل کي روڪڻ لاءِ هر کوهه ۾ 50 μL اسٽاپ سوليوشن شامل ڪريو.
8. مائڪروپليٽ ريڊر ۾ جذب کي 10 منٽن اندر 450 nm تي پڙهو (630nm جيئن ته لوازمات آهي).
وڌيڪ درستگي جي ڪارڪردگي لاءِ سفارش ڪئي وئي آهي).