Pecyn Canfod Gwrthgyrff Niwtraleiddio SARS-CoV-2 (ELISA) Testsealabs
【EGWYDDOR】
Mae Pecyn Canfod Gwrthgyrff Niwtraleiddio SARS-CoV-2 yn seiliedig ar fethodoleg ELISA gystadleuol.
Gan ddefnyddio parth rhwymo derbynnydd wedi'i buro (RBD), protein o'r protein pigyn firaol (S) a'r gell letyol
derbynnydd ACE2, mae'r prawf hwn wedi'i gynllunio i efelychu'r rhyngweithio niwtraleiddio firws-gwesteiwr.
Mae calibradwyr, Rheolyddion Ansawdd, a samplau serwm neu plasma yn cael eu cymysgu'n dda ar wahân mewn gwanhad.
byffer sy'n cynnwys cyfuniad hACE2-HRP wedi'i rannu mewn tiwbiau bach. Yna trosglwyddir y cymysgeddau i mewn
y ffynhonnau microplat sy'n cynnwys darn RBD SARS-CoV-2 ailgyfunol wedi'i ansefydlogi (RBD) ar gyfer
magu. Yn ystod y magu 30 munud, y gwrthgorff penodol i RBD yn y calibradwyr, QC a
bydd samplau'n cystadlu â'r hACE2-HRP am rwymo penodol i'r RBD sydd wedi'i ansefydlogi yn y pyllau. Ar ôl
yn ystod y cyfnod magu, caiff y pyllau eu golchi 4 gwaith i gael gwared ar gyfuniad hACE2-HRP heb ei rwymo. Toddiant o
Yna ychwanegir TMB a'i ddeori am 20 munud ar dymheredd ystafell, gan arwain at ddatblygiad
lliw glas. Mae datblygiad y lliw yn cael ei atal trwy ychwanegu 1N HCl, ac mae'r amsugnedd yn
wedi'i fesur yn sbectroffotometregol ar 450 nm. Mae dwyster y lliw a ffurfiwyd yn gymesur â'r
faint o ensym sy'n bresennol, ac mae'n gysylltiedig yn wrthdro â faint o safonau a aseswyd yn yr un ffordd.
Drwy gymharu â'r gromlin calibradu a ffurfiwyd gan y calibradwyr a ddarparwyd, crynodiad
yna cyfrifir gwrthgyrff niwtraleiddio yn y sampl anhysbys.
【DEUNYDDIAU SYDD EI ANGEN OND HEB EU DARPARU】
1. Dŵr distyll neu ddad-ïoneiddiedig
2. Pipetiau manwl gywir: 10μL, 100μL, 200μL ac 1 mL
3. Awgrymiadau piped tafladwy
4. Darllenydd microplatiau sy'n gallu darllen amsugnedd ar 450nm.
5. Papur amsugnol
6. Papur graff
7. Cymysgydd vortex neu gyfwerth
【CASGLU A STORIO SPESIMENAU】
1. Gellir defnyddio samplau serwm a plasma a gasglwyd mewn tiwbiau sy'n cynnwys K2-EDTA ar gyfer y pecyn hwn.
2. Dylid capio sbesimenau a gellir eu storio am hyd at 48 awr ar 2 °C - 8 °C cyn eu profi.
Dylid rhewi sbesimenau a gedwir am gyfnod hirach (hyd at 6 mis) unwaith yn unig ar -20 °C cyn eu profi.
Osgowch gylchoedd rhewi-dadmer dro ar ôl tro.
PROTOCOL
【Paratoi Adweithydd】
1. Rhaid tynnu pob adweithydd allan o'r oergell a gadael iddo ddychwelyd i dymheredd ystafell cyn ei ddefnyddio
(20° i 25°C). Cadwch yr holl adweithyddion yn yr oergell yn syth ar ôl eu defnyddio.
2. Dylid cymysgu pob sampl a rheolydd cyn eu defnyddio.
3. Paratoi Toddiant hACE2-HRP: Gwanhewch grynodiad hACE2-HRP ar gymhareb gwanhau o 1:51 gyda Gwanhad
Byffer. Er enghraifft, gwanhewch 100 μL o grynodiad hACE2-HRP gyda 5.0mL o Fyffer Gwanhau HRP i
gwneud toddiant hACE2-HRP.
4. Paratoi Toddiant Golchi 1×: Gwanhewch y Toddiant Golchi 20× gyda dŵr wedi'i ddad-ïoneiddio neu wedi'i ddistyllu gyda
cymhareb cyfaint o 1:19. Er enghraifft, gwanhewch 20 mL o Ddatrysiad Golchi 20× gyda 380 mL o ddad-ïoneiddiedig neu
dŵr distyll i wneud 400 mL o Doddiant Golchi 1×.
【Gweithdrefn Brawf】
1. Mewn tiwbiau ar wahân, rhannwch 120μL o'r Toddiant hACE2-HRP wedi'i baratoi.
2. Ychwanegwch 6 μL o galibradwyr, samplau anhysbys, rheolyddion ansawdd ym mhob tiwb a chymysgwch yn dda.
3. Trosglwyddwch 100μL o bob cymysgedd a baratowyd yng ngham 2 i'r tyllau microplat cyfatebol yn ôl
i gyfluniad prawf wedi'i gynllunio ymlaen llaw.
3. Gorchuddiwch y plât gyda Seliwr Platiau a'i ddeori ar 37°C am 30 munud.
4. Tynnwch y Seliwr Plât a golchwch y plât gyda thua 300 μL o Doddiant Golchi 1× fesul twll bedair gwaith.
5. Tapiwch y plât ar dywel papur i gael gwared ar hylif gweddilliol yn y pyllau ar ôl y camau golchi.
6. Ychwanegwch 100 μL o Doddiant TMB i bob twll a deorwch y plât yn y tywyllwch ar 20 - 25°C am 20 munud.
7. Ychwanegwch 50 μL o Doddiant Stopio i bob twll i atal yr adwaith.
8. Darllenwch yr amsugnedd mewn darllenydd microplatiau ar 450 nm o fewn 10 munud (630nm gan fod yr ategolyn yn
argymhellir ar gyfer perfformiad manwl gywirdeb uwch).

