SARS-COV-2 Neutralisierung Antikörper-Nachweis-Kit (ELISA)
【PRINZIP】
Das SARS-COV-2-Neutralisierungs-Antikörper-Erkennungskit basiert auf der wettbewerbsfähigen ELISA-Methodik.
Unter Verwendung von gereinigtem Rezeptorbindungsdomäne (RBD), Protein aus dem Virusspike (S) -Protein und der Wirtszelle
Rezeptor ACE2, dieser Test ist so ausgelegt, dass die neutralisierende Virus-Host-Interaktion nachahmt.
Kalibratoren, Qualitätskontrollen und Serum- oder Plasmaproben sind in der Verdünnung einzeln gut gemischt
Puffer, der HACE2-HRP-Konjugat enthält, aliquotiert in kleinen Röhren. Dann werden die Gemische in übertragen
Die Mikroplattenbrunnen, die immobilisierte rekombinante SARS-CoV-2 RBD-Fragment (RBD) enthält
Inkubation. Während der 30-minütigen Inkubation der RBD-spezifische Antikörper in den Kalibratoren, QC und
Die Proben konkurrieren mit dem HACE2-HRP um die spezifische Bindung der in den Brunnen immobilisierten RBD. Nach
Die Inkubation, die Brunnen werden viermal gewaschen, um ungebundenes Hace2-HRP-Konjugat zu entfernen. Eine Lösung von
TMB wird dann bei Raumtemperatur 20 Minuten bei Raumtemperatur zugegeben und inkubiert, was zur Entwicklung von a führt
Blaue Farbe. Die Farbentwicklung wird mit der Zugabe von 1n HCl gestoppt, und die Absorption ist
gemessene spektrophotometrisch bei 450 nm. Die Intensität der gebildeten Farbe ist proportional zur
Die Menge des vorhandenen Enzyms und ist umgekehrt mit der Menge der Standards verbunden, die auf die gleiche Weise getestet werden.
Durch Vergleich mit der von den bereitgestellten Kalibratoren gebildeten Kalibrierungskurve die Konzentration von
Anschließend wird neutralisierende Antikörper in der unbekannten Probe berechnet.
【Materialien erforderlich, aber nicht bereitgestellt】
1. destilliertes oder entionisiertes Wasser
2. Präzisionspipetten: 10 μl, 100 & mgr; l, 200 & mgr; l und 1 ml
3. Einweg -Pipetten -Tipps
4. Mikroplate -Leser, das bei 450 nm absorbiert wird.
5. Absorptionspapier
6. Diagrammpapier
7. Wirbelmischer oder gleichwertig
【Sammlung und Speicherung von Proben】
1. Für dieses Kit können Serum- und Plasmaproben, die in K2-EDTA entnommen werden, entnommen werden.
2. Die Proben sollten begrenzt und bis zu 48 Stunden bei 2 ° C - 8 ° C vor der Prüfung gelagert werden.
Proben, die für eine längere Zeit (bis zu 6 Monate) gehalten werden, sollten vor dem Assay nur einmal bei -20 ° C eingefroren werden.
Vermeiden Sie wiederholte Einfrieren-Tau-Zyklen.
PROTOKOLL
【Reagenzvorbereitung】
1. Alle Reagenzien müssen aus der Kühlung herausgenommen und vor dem Gebrauch zur Raumtemperatur zurückkehren gelassen werden
(20 ° bis 25 ° C). Speichern Sie alle Reagenzien im Kühlschrank sofort nach der Verwendung.
2. Alle Proben und Steuerelemente sollten vor der Verwendung verwirbelt werden.
3.. HACE2-HRP-Lösungsvorbereitung: Verdünnter Hace2-HRP-Konzentrat bei 1: 51-Verdünnungsverhältnis mit Verdünnung
Puffer. Beispielsweise verdünnen Sie 100 & mgr; l Hace2-HRP
Machen Sie eine HACE2-HRP-Lösung.
4. 1 × Waschlösung Vorbereitung: Verdünnen Sie die 20 × Waschlösung mit entionisiertem oder destilliertem Wasser mit a
Volumenverhältnis von 1:19. Zum Beispiel 20 ml 20 × Waschlösung mit 380 ml entionisiert oder
Destilliertes Wasser, um 400 ml 1 × Waschlösung herzustellen.
【Testverfahren】
1. In getrennten Röhrchen Aliquot 120 μl der vorbereiteten Hace2-HRP-Lösung.
2. Fügen Sie 6 & mgr; l Kalibratoren, unbekannte Proben, Qualitätskontrollen in jedem Röhrchen hinzu und mischen Sie gut.
3.. Übertragen Sie 100 & mgr; l jeder in Schritt 2 hergestellten Mischung in entsprechende Mikroplattenbrunnen nach
zur vorgegebenen Testkonfiguration.
3. Decken Sie die Platte mit Plattenversiegelung und inkubieren Sie 30 Minuten bei 37 ° C.
4. Entfernen Sie die Plattenverdichtung und waschen Sie die Platte mit ungefähr 300 μl 1 × Waschlösung pro Vertiefung viermal.
5. Klopfen Sie den Teller auf dem Papiertuch auf, um die Restflüssigkeit in den Brunnen nach dem Waschen zu entfernen.
6. 100 & mgr; l TMB -Lösung in jede Vertiefung hinzufügen und die Platte 20 Minuten bei 20 bis 25 ° C inkubieren.
7. 50 & mgr; l Stopplösung in jede Vertiefung hinzufügen, um die Reaktion zu stoppen.
8. Lesen Sie die Absorption im Mikroplattenleser bei 450 nm innerhalb von 10 Minuten (630 nm als Zubehör ist
Empfohlen für eine höhere Präzisionsleistung).