Testsealabs SARS-CoV-2 Neutralizatzaileen Antigorputzak Detektatzeko Kit-a (ELISA)
Deskribapen laburra:
SARS-CoV-2 Neutralizatzaileen Antigorputzen Test Kasetea kromatografia immunoanalisi azkar bat da. Analisi hau 2019ko Koronabirus Gaixotasunaren aurkako neutralizatzaile antigorputzak kualitatiboki detektatzeko diseinatuta dago. Gizakien odol osoarekin, serumarekin edo plasmarekin erabil daiteke. Probak laguntza gisa balio du gizakien koronabirus berriaren aurkako neutralizatzaile antigorputzen tituluen mailak ebaluatzeko.
 Emaitza azkarrak: laborategiko zehaztasuna minutu gutxitan | Laborategiko Mailako Zehaztasuna: Fidagarria eta Konfiantzazkoa |
| Edozein lekutan probatu: ez da laborategira joan beharrik | Kalitate Ziurtatua: 13485, CE, Mdsap betetzen du |
| Sinplea eta arinduta: erabiltzeko erraza, arazorik gabe | Erosotasun gorena: Egin probak eroso etxean |
【PRINTZIPIOA】
SARS-CoV-2 Neutralizatzen duten Antigorputzak Detektatzeko Kit-a ELISA metodologia lehiakorrean oinarritzen da.
Hartzaileen lotura-domeinu purifikatua (RBD), birus-puntaren (S) proteina eta ostalari-zelula erabiliz
ACE2 hartzailea, proba hau birusaren eta ostalariaren arteko neutralizazio-elkarrekintza imitatzeko diseinatuta dago.
Kalibratzaileak, Kalitate Kontrolak eta serum edo plasma laginak banan-banan diluzioan ondo nahasten dira.
hACE2-HRP konjugatua duen bufferra hodi txikietan zatituta. Ondoren, nahasteak transferitzen dira
SARS-CoV-2 RBD zati birkonbinatu (RBD) immobilizatua duten mikroplaka putzuak
inkubazioa. 30 minutuko inkubazioan zehar, kalibragailuetan, QC-an eta RBD antigorputz espezifikoan
laginak hACE2-HRP-arekin lehiatuko dira putzuetan immobilizatutako RBD-aren lotura espezifikorako. Ondoren
Inkubazioan, putzuak 4 aldiz garbitzen dira hACE2-HRP konjugatu lotu gabea kentzeko. Honen soluzio bat
Ondoren, TMB gehitzen da eta 20 minutuz inkubatzen da giro-tenperaturan, eta horren ondorioz garatzen da...
kolore urdina. Kolorearen garapena 1N HCl gehituz gelditzen da, eta xurgapena da
espektrofotometrikoki 450 nm-tan neurtua. Sortutako kolorearen intentsitatea proportzionala da
dagoen entzima kantitatea, eta alderantzizko erlazioa du modu berean aztertutako estandarren kantitatearekiko.
Emandako kalibratzaileek osatutako kalibrazio-kurbarekin alderatuz, -ren kontzentrazioa
Ondoren, lagin ezezagunaren antigorputz neutralizatzaileak kalkulatzen dira.
【BEHARREZKO MATERIALAK BAINA EZ DIRA EMAN】
1. Ur destilatua edo desionizatua
2. Zehaztasun pipetak: 10 μL, 100 μL, 200 μL eta 1 mL
3. Pipeta puntak botatzeko
4. 450nm-tan xurgapena irakurtzeko gai den mikroplaka irakurgailua.
5. Paper xurgatzailea
6. Grafiko-papera
7. Vortex nahasgailua edo baliokidea
【LAGINEN BILKETA ETA BILTEGIRATZEA】
1. K2-EDTA duten hodietan bildutako serum eta plasma laginak erabil daitezke kit honetarako.
2. Laginak tapoi batekin itxi behar dira eta 48 orduz gorde daitezke 2 °C - 8 °C-tan analisia egin aurretik.
Denbora luzez (6 hilabetera arte) gordetako laginak behin bakarrik izoztu behar dira -20 °C-tan analisia egin aurretik.
Saihestu izozte-desizozte ziklo errepikatuak.
PROTOKOLOA
【Erreaktiboen prestaketa】
1. Erabili aurretik erreaktibo guztiak hozkailutik atera eta giro-tenperaturara itzultzen utzi behar dira.
(20° eta 25°C artean). Erabili ondoren, erreaktibo guztiak hozkailuan gorde.
2. Lagin eta kontrol guztiak erabili aurretik zurrunbiloan nahastu behar dira.
3. hACE2-HRP Soluzioaren Prestaketa: Diluitu hACE2-HRP kontzentratua 1:51 diluzio-erlazioan Diluzioarekin
Bufferra. Adibidez, diluitu 100 μL hACE2-HRP kontzentratu 5,0 ml HRP Diluzio Bufferrarekin
egin hACE2-HRP soluzio bat.
4. 1× Garbiketa Disoluzioaren Prestaketa: Diluitu 20× Garbiketa Disoluzioa ur desionizatu edo destilatuarekin
1:19ko bolumen-erlazioan. Adibidez, diluitu 20 ml 20× garbiketa-soluzioko 380 ml desionizatutako edo
ur destilatua 400 ml 1× garbiketa-disoluzio egiteko.
【Proba Prozedura】
1. Hodi bereizietan, prestatutako hACE2-HRP disoluzioaren 120 μL zatitu.
2. Gehitu 6 μL kalibratzaile, lagin ezezagun eta kalitate-kontrolak hodi bakoitzean eta nahastu ondo.
3. 2. urratsean prestatutako nahasketa bakoitzeko 100 μL dagokion mikroplaka-putzuetara transferitu, adierazitakoaren arabera.
aldez aurretik diseinatutako proba konfiguraziora.
3. Estali plaka Plaka Zigilatzailearekin eta inkubatu 37 °C-tan 30 minutuz.
4. Kendu plaka-zigilatzailea eta garbitu plaka putzu bakoitzeko 300 μL gutxi gorabehera 1× garbiketa-soluzioarekin, lau aldiz.
5. Garbiketa-urratsen ondoren, plaka paperezko eskuoihal batean jo ezazu putzuetan geratzen den likidoa kentzeko.
6. Gehitu 100 μL TMB Soluzio putzu bakoitzera eta inkubatu plaka iluntasunean 20 - 25 °C-tan 20 minutuz.
7. Gehitu 50 μL geldiarazteko disoluzio putzu bakoitzean erreakzioa geldiarazteko.
8. Irakurri mikroplaka irakurgailuan xurgapena 450 nm-tan 10 minututan (630 nm osagarria bada).
zehaztasun handiagoa lortzeko gomendatua).