SARS-COV-2 Neutralisearjende antyLody-deteksje Kit (Elisa)
【PRINSIPE】
De SARS-COV-2 Neutralising ANTIBOMY-deteksje Kit is basearre op kompetitive Elisa-metodology.
Mei suverige receptor-bining domein (RBD), proteïne fan 'e virale spike (s) Protein en de gasthear
Receptor Ace2, dizze test is ûntworpen om de namme fan 'e virushost neutralisearjen te imitearjen.
Kalibratoren, kwaliteitskontrôles, en serum as plasma-samples wurde yndividueel goed mingd yn verdunning
Buffer mei HACE2-HRP fernijde aliquoted yn lytse buizen. Dan wurde de miksjes oerbrocht yn
de mikroplate wells dy't immobilisearre rekombinant sars-cov-2 rbd fragmint (RBD) (RBD)
ynkubaasje. Tidens de ynkubaasje fan 30 minuten, de RBD-spesifike antistulaasje yn 'e kalibratoren, QC en
Sonples sille konkurrearje mei de HCE2-HRP foar spesifike bining fan 'e RBD immobilisearre yn' e boarne. Nei
De ynkubaasje, de Wells wurde 4 kear wosken om undround HRCE2-HRP konjugearre te ferwiderjen. In oplossing fan
TMB wurdt dan 20 minuten tafoege en ynkubeare by keamertemperatuer, resultearret yn 'e ûntwikkeling fan in
Blauwe kleur. De kleurûntwikkeling wurdt stoppe mei de tafoeging fan 1n HCL, en de absorbânsje is
mjitten spektroomhotometrysk op 450 nm. De yntinsiteit fan 'e foarme is foarme is proporsjoneel oan' e
Bedrach fan Enzyme-oanwêzich, en is rommel relatearre oan it bedrach fan noarmen dy't op deselde manier assay binne.
Troch fergeliking mei de kalibraasjekrime foarme troch de levere kalibratoren, de konsintraasje fan
Neutralisearjende antistoffen yn it ûnbekende stekproef wurdt dan berekkene.
【Materiaal nedich, mar net levere】
1. Distillearre as deionisearre wetter
2. Precision Pipetes: 10μl, 100μl, 200μL en 1 ML
3. Disposable Pipette-tips
4. Mikroplate lêzer yn steat om absorbinaasje te lêzen by 450nm.
5 absorberend papier
6 grafyk papier
7 Vortex mixer as lykweardich
【SPECEMEN COLLECTION EN STORAGE】
1 Serum en plasma-samples sammele yn buizen dy't K2-EDTA befetsje kin brûkt wurde foar dizze kit.
2. Specimens moatte wurde bedekt en kin wurde opslein foar maksimaal 48 oeren op 2 ° C - 8 ° C foarôfgeand oan it assolearjen.
Specimens hâlden foar in langere tiid (oant 6 moannen) moatte mar ien kear beferzen wêze op -20 ° C foarôfgeand oan Assay.
Foarkomme werhelle frysh-tweachskes.
Protokol
【Reagens】
1. Alle reagens moatte úthelle wurde fan koelkast en tastien om werom te gean nei keamertemperatuer foar gebrûk
(20 ° oant 25 ° C). Bewarje alle reagens yn koelkast direkt nei gebrûk.
2. Alle samples en kontrôles moatte vortexed wêze foar gebrûk.
3. HACE2-HRP-oplossing tarieding: Vilute HACE2-HRP konsentraat op 1: 51 verdunningferhâlding mei verdunning
Buffer. Dygelok 100 μl fan HCE2-HRP konsentraat mei 5,0ml fan HRP-verbefolking Buffer nei
meitsje in hace2-hrp-oplossing.
4. 1 × Waskapperaasje tarieding: verdunt de 20 × waskje oplossing mei deionisearre as destilled wetter mei in
Folumeafatio fan 1:19. Dauwe bygelyks 20 ml fan 20 × waskje oplossing mei 380 ml fan deionisearre as
Distillearre wetter om 400 ml fan 1 × waskje oplossing te meitsjen.
【Testproseduere】
1. Yn aparte buizen, aliquot 120μl fan 'e tariede hace2-hrp-oplossing.
2 Foegje 6 μl fan kalibratoren ta, ûnbekende samples, kwaliteitsbouwen yn elke buis en mingje goed.
3. Oerdracht 100μl fan elk mingsel taret yn 'e stap 2 yn oerienkommende mikroplate-wells neffens
om testkonfiguraasje te foarkommen.
3. Cover de plaat mei plaat-sealer en ynskeakelje op 37 ° C foar 30 minuten.
4 Fuortsmite de plaat-sealer en waskje de plaat mei sawat 300 μl fan 1 × waskje oplossing per Wellfor per fleurige kear.
5 Tap op 'e plaat op papierhandoek om residuele floeistof te ferwiderjen yn' e boarnen nei it wassen fan stappen.
6. Foegje 100 μl fan TMB-oplossing ta oan elke goed en inkubearje de plaat yn tsjuster yn tsjuster op 20 - 25 ° C foar 20 minuten.
7 Foegje 50 μl fan stopoplossing ta oan elke goed om de reaksje te stopjen.
8. Lês de absorbering yn Microplate Reader by 450 NM binnen 10 minuten (630nm as accessoire is
oanrikkemandearre foar prestaasjes fan hegere presys).