Trealamh Braite Antashubstaintí Neodraithe SARS-CoV-2 (ELISA) Testsealabs
【PRIONSABAL】
Tá an Trealamh Braite Antashubstaintí Neodraithe SARS-CoV-2 bunaithe ar mhodheolaíocht ELISA iomaíoch.
Ag baint úsáide as fearann ceangailteach gabhdóra íonaithe (RBD), próitéin ón bpróitéin spíce víreasach (S) agus an chill óstach
gabhdóir ACE2, tá an tástáil seo deartha chun aithris a dhéanamh ar an idirghníomhaíocht neodraithe víris-óstach.
Déantar calabróirí, rialuithe cáilíochta, agus samplaí séiream nó plasma a mheascadh go maith ina n-aonar i gcaolú.
maolán ina bhfuil comhchuingeach hACE2-HRP roinnte i bhfeadáin bheaga. Ansin aistrítear na meascáin isteach
na tobair micreaphláta ina bhfuil blúire RBD athchuingreach SARS-CoV-2 neamhghluaiste (RBD) le haghaidh
goradh. Le linn an ghoir 30 nóiméad, an t-antasubstaint shonrach RBD sna calabraitheoirí, QC agus
Beidh na samplaí san iomaíocht leis an hACE2-HRP le haghaidh ceangal sonrach leis an RBD atá imghluaiste sna toibreacha. Ina dhiaidh sin
Le linn an ghoir, nitear na toibreacha ceithre huaire chun comhchuingeach neamhcheangailte hACE2-HRP a bhaint. Tuaslagán de
Cuirtear TMB leis ansin agus gortar é ar feadh 20 nóiméad ag teocht an tseomra, rud a fhágann go bhforbraítear
dath gorm. Cuirtear stop le forbairt an datha nuair a chuirtear 1N HCl leis, agus is é an ionsú
tomhaiste go speictreafótaiméadrach ag 450 nm. Tá déine an datha a chruthaítear comhréireach leis an
méid an einsíme atá i láthair, agus tá sé gaolmhar go hinbhéartach le méid na gcaighdeán a ndéantar measúnú orthu ar an mbealach céanna.
Trí chomparáid a dhéanamh leis an gcuar calabrúcháin a chruthaigh na calabraitheoirí a cuireadh ar fáil, tiúchan
ansin ríomhtar antasubstaintí neodraithe sa sampla anaithnid.


【ÁBHAIR RIACHTANACHA ACH NACH bhFUIL SOLÁTHRAITHE】
1. Uisce driogtha nó dí-ianaithe
2. Pipetí beachtais: 10μL, 100μL, 200μL agus 1 mL
3. Leideanna pipéid indiúscartha
4. Léitheoir micreaphláta atá in ann ionsú a léamh ag 450nm.
5. Páipéar ionsúiteach
6. Páipéar graif
7. Meascthóir vortex nó a chomhionann
【BAILIÚ AGUS STÓRÁIL SAMPAILL】
1. Is féidir samplaí séiream agus plasma a bhailítear i bhfeadáin ina bhfuil K2-EDTA a úsáid don trealamh seo.
2. Ba chóir eiseamail a bheith caipínithe agus féadfar iad a stóráil ar feadh suas le 48 uair an chloig ag 2 °C - 8 °C sula ndéantar tástáil orthu.
Níor cheart eiseamail a choimeádtar ar feadh tréimhse níos faide (suas le 6 mhí) a reo ach uair amháin ag -20 °C roimh an measúnú.
Seachain timthriallta reo-leá arís agus arís eile.
PRÓTACAL

【Ullmhú Imoibrí】
1. Ní mór na himoibrithe go léir a bhaint as an gcuisneoir agus ligean dóibh filleadh ar theocht an tseomra roimh úsáid.
(20° go 25°C). Sábháil na himoibrithe go léir sa chuisneoir díreach tar éis úsáide.
2. Ba chóir na samplaí agus na rialuithe uile a mheascadh le chéile roimh úsáid.
3. Ullmhú Tuaslagáin hACE2-HRP: Caolaigh tiúchan hACE2-HRP ag cóimheas caolaithe 1:51 le Caolú
Maolán. Mar shampla, caolaigh 100 μL de thiúchan hACE2-HRP le 5.0mL de Mhaolán Caolaithe HRP go
tuaslagán hACE2-HRP a dhéanamh.
4. Ullmhú Tuaslagáin Níocháin 1×: Caolaigh an Tuaslagán Níocháin 20× le huisce dí-ianaithe nó driogtha le
cóimheas toirte de 1:19. Mar shampla, caolaigh 20 mL de Thuaslagán Níocháin 20× le 380 mL de dhí-ianaithe nó
uisce driogtha chun 400 mL de Thuaslagán Níocháin 1× a dhéanamh.
【Nós Imeachta Tástála】
1. I bhfeadáin ar leithligh, déan 120μL den Tuaslagán hACE2-HRP ullmhaithe a roinnt.
2. Cuir 6 μL de chalabróirí, samplaí anaithnide, rialuithe cáilíochta i ngach feadán agus measc go maith.
3. Aistrigh 100μL de gach meascán a ullmhaíodh i gcéim 2 isteach sna toibreacha micreaphláta comhfhreagracha de réir
chuig cumraíocht tástála réamhdheartha.
3. Clúdaigh an pláta le Séalaitheoir Pláta agus gorlaigh ag 37°C ar feadh 30 nóiméad é.
4. Bain an Séalaitheoir Pláta agus nigh an pláta le thart ar 300 μL de 1× Tuaslagán Níocháin in aghaidh an tobair ceithre huaire.
5. Buail an pláta ar thuáille páipéir chun aon leacht atá fágtha sna toibreacha a bhaint i ndiaidh na gcéimeanna níocháin.
6. Cuir 100 μL de thuaslagán TMB le gach tobar agus gor an pláta sa dorchadas ag 20 - 25°C ar feadh 20 nóiméad.
7. Cuir 50 μL de Thuaslagán Stop le gach tobar chun an t-imoibriú a stopadh.
8. Léigh an ionsú i léitheoir micreaphláta ag 450 nm laistigh de 10 nóiméad (630nm mar ghabhálas atá ann
molta le haghaidh feidhmíochta cruinneas níos airde).