Testsealabs SARS-CoV-2 hlutleysandi mótefnagreiningarbúnaður (ELISA)
【MEGINREGLA】
SARS-CoV-2 mótefnagreiningarbúnaðurinn byggir á samkeppnishæfri ELISA aðferðafræði.
Með því að nota hreinsað viðtakabindandi lén (RBD), prótein úr veiruspike (S) próteini og hýsilfrumu
viðtakanum ACE2, þetta próf er hannað til að líkja eftir hlutleysandi víxlverkun veiru og hýsils.
Kvörðunartæki, gæðaeftirlit og sermi- eða plasmasýni eru vel blandað saman í þynningu.
stuðpúði sem inniheldur hACE2-HRP tengingu, skipt í litlar rör. Síðan eru blöndurnar fluttar í
örplötubrunnarnir sem innihalda óhreyfanlegt endurmyndað SARS-CoV-2 RBD brot (RBD) fyrir
Ræktun. Á 30 mínútna ræktuninni skal RBD-sértæka mótefnið í kvörðunartækjunum, gæðaeftirlitinu og
Sýnin munu keppa við hACE2-HRP um sértæka bindingu við RBD sem er fast í brunnunum. Eftir
Í ræktuninni eru brunnarnir þvegnir fjórum sinnum til að fjarlægja óbundið hACE2-HRP tengingarefni. Lausn af
TMB er síðan bætt við og ræktað í 20 mínútur við stofuhita, sem leiðir til myndunar
blár litur. Litamyndunin er stöðvuð með því að bæta við 1N HCl og gleypnin er
mælt með litrófsmælingu við 450 nm. Litstyrkur sem myndast er í réttu hlutfalli við
Magn ensíms sem er til staðar og er í öfugu hlutfalli við magn staðla sem eru prófaðir á sama hátt.
Með samanburði við kvörðunarferilinn sem myndaður er með meðfylgjandi kvörðunartækjum, er styrkur
Hlutleysandi mótefni í óþekkta sýninu eru síðan reiknuð út.
【EFNI SEM ER NAUÐSYNLEGT EN EKKI LEIFT FYRIR】
1. Eimað eða afjónað vatn
2. Nákvæmar pípettur: 10 μL, 100 μL, 200 μL og 1 ml
3. Einnota pípettuoddar
4. Örplötulesari sem getur lesið gleypni við 450 nm.
5. Gleypið pappír
6. Milligrafpappír
7. Vortex-blandari eða sambærilegt
【SÝNASÖFNUN OG GEYMSLA】
1. Í þetta sett má nota sermi- og plasmasýni sem tekin eru í rörum sem innihalda K2-EDTA.
2. Sýni skulu vera lokuð og má geyma þau í allt að 48 klukkustundir við 2°C - 8°C fyrir mælingu.
Sýni sem geymd eru í lengri tíma (allt að 6 mánuði) ætti aðeins að frysta einu sinni við -20°C fyrir prófun.
Forðist endurteknar frystingar-þíðingarlotur.
SAMSKIPTI
【Undirbúningur hvarfefnis】
1. Öll hvarfefni verða að vera tekin úr kæli og látin ná stofuhita áður en þau eru notuð.
(20° til 25°C). Geymið öll hvarfefni í kæli strax eftir notkun.
2. Öll sýni og samanburðarpróf skulu hrist með vortex-blöndu fyrir notkun.
3. Undirbúningur hACE2-HRP lausnar: Þynnið hACE2-HRP þykknið í þynningarhlutfallinu 1:51 með Dilution
Stöðvalausn. Til dæmis, þynnið 100 μL af hACE2-HRP þykkni með 5,0 ml af HRP þynningarstöðvalausn til að
Búðu til hACE2-HRP lausn.
4. Undirbúningur 1× þvottalausnar: Þynnið 20× þvottalausnina með afjónuðu eða eimuðu vatni með
rúmmálshlutfall 1:19. Til dæmis, þynnið 20 ml af 20× þvottalausn með 380 ml af afjónaðri eða
eimað vatn til að búa til 400 ml af 1× þvottalausn.
【Prófunaraðferð】
1. Í aðskildum rörum skal deila 120 μL af útbúinni hACE2-HRP lausn.
2. Bætið 6 μL af kvörðunarbúnaði, óþekktum sýnum og gæðaeftirliti út í hvert rör og blandið vel saman.
3. Færið 100 μL af hverri blöndu sem útbúin var í skrefi 2 í samsvarandi örplötubrunnar samkvæmt leiðbeiningum.
við fyrirfram hannaða prófunarstillingu.
3. Hyljið plötuna með Plate Sealer og ræktið við 37°C í 30 mínútur.
4. Fjarlægið plötuþéttiefnið og þvoið plötuna fjórum sinnum með um það bil 300 μL af 1× þvottalausn í hvert brunn.
5. Bankið létt á plötuna á pappírsþurrku til að fjarlægja leifar af vökva í holunum eftir þvott.
6. Bætið 100 μL af TMB lausn í hvern brunn og ræktið plötuna í myrkri við 20-25°C í 20 mínútur.
7. Bætið 50 μL af stöðvunarlausn í hvern brunn til að stöðva viðbrögðin.
8. Lesið gleypnina í örplötulesara við 450 nm innan 10 mínútna (630 nm þar sem aukabúnaður er
mælt með fyrir meiri nákvæmni).

