Instrumentum Detectionis Anticorporum Neutralizantium SARS-CoV-2 Testsealabs (ELISA)
【PRINCIPIUM】
Instrumentum ad Detectionem Anticorporum Neutralizantium SARS-CoV-2 methodologia ELISA competitiva innititur.
Utentibus dominio ligationis receptoris purificato (RBD), proteino ex proteino spiculae viralis (S) et cellula hospitis.
receptorem ACE2, hoc experimentum destinatum est ad interactionem neutralizantem virus et hospitis imitandam.
Calibratores, moderatores qualitatis, et exempla seri vel plasmatis singillatim bene in dilutione miscentur.
...coniugatum hACE2-HRP continens, in tubulis parvis aliquotatum. Deinde mixturae transferuntur in...
putei microplacarum continentes fragmentum RBD (RBD) SARS-CoV-2 recombinatum immobilizatum pro
incubatio. Per incubationem triginta minutorum, anticorpus RBD specificum in calibratoribus, QC et
Exempla cum hACE2-HRP pro nexu specifico RBD in puteis immobilizato certabunt. Post
Incubatione peracta, putei quater lavantur ut coniugatum hACE2-HRP non ligatum removeatur. Solutio...
Deinde TMB additur et per viginti minuta ad temperaturam cubiculi incubatur, quod efficit ut...
color caeruleus. Progressio coloris additione 1N HCl impeditur, et absorptio est
spectrophotometrice ad 450 nm mensuratum. Intensitas coloris formati proportionalis est
quantitatem enzymi praesentis, et inverse relata est ad quantitatem standardorum eodem modo probatorum.
Per comparationem cum curva calibrationis a calibratoribus provisis formata, concentratio
deinde anticorpora neutralizantia in exemplo ignoto computantur.
【MATERIAE REQUISITAE SED NON PRAEBITAE】
1. Aqua destillata vel deionizata
2. Pipettae accuratae: 10μL, 100μL, 200μL et 1 mL
3. Apices pipettarum disposable
4. Lector microlaminarum capax legendi absorptionem ad 450nm.
5. Charta absorbens
6. Charta graphica
7. Mixtor vortex vel aequivalens
【COLLECTIO ET CONSERVATIO SPECIMENUM】
1. Exempla seri et plasmatis in tubis K2-EDTA continentibus collecta pro hoc apparatu adhiberi possunt.
2. Specimina operculo obducta sunt et usque ad horas 48 inter 2°C et 8°C ante analysin conservari possunt.
Specimina diutius (usque ad sex menses) servata semel tantum ad -20°C ante experimentum congelanda sunt.
Cyclos congelationis et liquefactionis repetitos vita.
PROTOCOLUM
【Praeparatio Reagentis】
1. Omnia reagentia e refrigeratione extrahenda et ad temperaturam cubiculi redire permittenda sunt ante usum.
(20° ad 25°C). Omnia reagentia post usum statim in armario frigidario serva.
2. Omnia exempla et moderamina ante usum vortex agitanda sunt.
3. Praeparatio Solutionis hACE2-HRP: Dilue concentratum hACE2-HRP ad rationem dilutionis 1:51 cum Dilutione.
Tampon. Exempli gratia, dilue 100 μL concentrati hACE2-HRP cum 5.0 mL tamponis dilutionis HRP ad
solutionem hACE2-HRP para.
4. Praeparatio Solutionis Lavationis 1×: Solutionem Lavationis 20× aqua deionizata vel destillata dilue.
proportione voluminis 1:19. Exempli gratia, dilue 20 mL Solutionis Lavationis 20× cum 380 mL aquae deionizatae vel
aqua destillata ad 400 mL Solutionis Lavationis 1× conficiendam.
【Ratio Probationis】
1. In tubis separatis, portionem 120 μL Solutionis hACE2-HRP praeparatae divide.
2. Adde 6 μL calibratorum, exemplorum ignotorum, et moderaminum qualitatis in singulis tubis et bene misce.
3. Transfere 100μL cuiusque mixturae in gradu 2 praeparatae in puteos microplacae correspondentes secundum...
ad configurationem probationis praeformatam.
3. Laminam obturatorio laminarum tege et ad 37°C per 30 minuta incuba.
4. Obsignatorem laminae remove et laminam quater cum circiter 300 μL Solutionis Lavationis 1× per puteum lava.
5. Laminam in charta bibula pulsa ut liquor residuus in puteis post gradus ablutionis removeatur.
6. Adde 100 μL Solutionis TMB in singulos puteos et incuba laminam in tenebris ad 20-25°C per 20 minuta.
7. Adde 50 μL Solutionis Sistendi in singulos puteos ut reactionem sistatur.
8. Absorptionem in lectore microplacarum ad 450 nm intra 10 minuta lege (630 nm ut accessorium est).
(ad maiorem praecisionem commendatur).

