Sars-cro-2 നിർവീര്യമാക്കൽ ആന്റിബോഡി കണ്ടെത്തൽ കിറ്റ് (എലിസ)
പതനംതതംപതനം
സാർസ്-കോത്ത് -2 നിർവീര്യമാക്കുന്ന ആന്റിബോഡി ഡിറ്റക്ഷൻ കിറ്റ് മത്സര എലിസ രീതിശാസ്ത്രത്തെ അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ളതാണ്.
ശുദ്ധീകരിച്ച റിസപ്റ്റർ ബൈൻഡിംഗ് ഡൊമെയ്ൻ (ആർബിഡി), വൈറൽ സ്പൈക്ക് (കൾ) പ്രോട്ടീൻ, ഹോസ്റ്റ് സെൽ എന്നിവയിൽ നിന്നുള്ള പ്രോട്ടീൻ ഉപയോഗിക്കുന്നു
റിസോർട്ട് അസെ 2, ഈ പരിശോധന രൂപകൽപ്പന ചെയ്തിരിക്കുന്നത് വൈറസ്-ഹോസ്റ്റ് നിർവീര്യമാക്കൽ ആശയവിനിമയത്തെ അനുകരിക്കുന്നു.
കാലിബ്രേറ്റർമാർ, ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണങ്ങൾ, സെറം അല്ലെങ്കിൽ പ്ലാസ്മ സാമ്പിളുകൾ വ്യക്തിഗതമായി ലയിപ്പിക്കൽ
ഹേസ് 2-എച്ച്ആർപി അടങ്ങിയിരിക്കുന്ന ബഫർ ചെറിയ ട്യൂബുകളിൽ അലിക്കോട്ട് ചെയ്തു. തുടർന്ന് മിശ്രിതങ്ങൾ കൈമാറി
രോഗശമനമേഖലയുള്ള ഓർമ്മപ്പെടുത്തൽ ചെയ്ത റീകോബിനാന്റ് സാംസ്-കോത്ത് -2 ആർബിഡി ശകലം (ആർബിഡി)
ഇൻകുബേഷൻ. 30 മിനിറ്റ് ഇൻകുബേഷനിൽ, കാലിബ്രറ്റർമാരിൽ ആർബിഡി നിർദ്ദിഷ്ട ആന്റിബോഡി, ക്യുസി,
ചെ കിണറുകളിൽ ആർബിഡി നിശ്ചലമാക്കുന്നതിന് പ്രത്യേക ബൈൻഡിംഗിനായി ഹസ് 2-എച്ച്ആർപിയുമായി സാമ്പിളുകൾ മത്സരിക്കും. പിന്നീടുള്ള
ഇൻകുബേഷൻ, അൺബ ound ണ്ട് ഹേസ് 2-എച്ച്ആർപി സംയോജനം നീക്കംചെയ്യാൻ കിണറുകൾ 4 തവണ കഴുകുന്നു. ഒരു പരിഹാരം
TMB ചേർത്ത് room ഷ്മാവിൽ 20 മിനിറ്റ് ചേർത്ത് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുന്നു, അതിന്റെ ഫലമായി a
നീല നിറം. 1 എൻ എച്ച്.സി.എൽ ചേർത്ത് വർണ്ണ വികസനം നിർത്തി, ആഗിരണം
സ്പെക്ട്രോഫൊട്ടോമെട്രെയ്റ്റ് 450 എൻഎം അളക്കുന്നു. രൂപീകരിച്ച നിറത്തിന്റെ തീവ്രത അനുപാതമാണ്
എൻസൈമിന്റെ അളവ്, അതേ രീതിയിൽ പരിശോധിക്കുന്ന മാനദണ്ഡങ്ങളുടെ അളവുമായി വിപരീതമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു.
നൽകിയ കാലിബ്രാറ്റർമാർ രൂപീകരിച്ച കാലിബ്രേഷൻ കർവ് താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ
അജ്ഞാത സാമ്പിളിലെ ആന്റിബോഡികൾ നിർവീര്യമാക്കുന്നത് കണക്കാക്കുന്നു.
പതനംആവശ്യമായ വസ്തുക്കൾ പക്ഷേ നൽകിയിട്ടില്ലപതനം
1. വാറ്റിയെടുക്കുക അല്ലെങ്കിൽ നിർണ്ണയിക്കപ്പെടുന്ന വെള്ളം
2. പ്രിസിഷൻ പൈപ്പറ്റുകൾ: 10μl, 100μl, 200μl, 1 മില്ലി
3. ഡിസ്പോസിബിൾ പൈപ്പറ്റ് ടിപ്പുകൾ
4. മൈക്രോ ടെംപ്ലേറ്റർ 450nm- ൽ ആഗിരണം വായിക്കാൻ കഴിവുണ്ട്.
5. കടലാസ് കടലാസ്
6. ഗ്രാഫ് പേപ്പർ
7. വോർടെക്സ് മിക്സർ അല്ലെങ്കിൽ തത്തുല്യമായത്
പതനംസ്പെസിം ശേഖരണവും സംഭരണവുംപതനം
1. കെ 2-എട്റ്റ അടങ്ങിയ ട്യൂബുകളിൽ ശേഖരിച്ച സെറം, പ്ലാസ്മ സാമ്പിളുകൾ ഈ കിറ്റിനായി ഉപയോഗിക്കാം.
2. മാതൃകകൾ ക്യാപ് ചെയ്യേണ്ടതും 2 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ 2 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ വരെയും പരിശോധിക്കാം.
കൂടുതൽ സമയത്തേക്ക് (6 മാസം വരെ) നടക്കുന്ന മാതൃകകൾ അസ്സെയ്ക്ക് മുമ്പായി -20 ° C ന് മാത്രം മരവിപ്പിക്കണം.
ആവർത്തിച്ചുള്ള ഫ്രീസ്-ഇറ്റ് സൈക്കിളുകൾ ഒഴിവാക്കുക.
പ്രോട്ടോക്കോൾ
പതനംറിയാജന്റ് തയ്യാറാക്കൽപതനം
1. എല്ലാ പ്രതിരോധങ്ങളും ശീതീകരണത്തിൽ നിന്ന് പുറത്തെടുത്ത് ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് room ഷ്മാസത്തിലേക്ക് മടങ്ങാൻ അനുവദിക്കണം
(20 ° മുതൽ 25 ° C വരെ). ഉപയോഗിച്ചതിനുശേഷം ഉടനടി റിഫ്രിജറേറ്ററിൽ എല്ലാ പ്രതിരോധങ്ങളും സംരക്ഷിക്കുക.
2. എല്ലാ സാമ്പിളുകളും നിയന്ത്രണങ്ങളും ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് ചുഴികണം.
3. ഹേസ് 2-എച്ച്ആർപി പരിഹാര തയ്യാറെടുപ്പ്: ഹേസ് 2-എച്ച്ആർപി ലയിപ്പിക്കൽ ലയിപ്പിക്കൽ ഉപയോഗിച്ച് ലയിപ്പിക്കുക
ബഫർ. ഉദാഹരണത്തിന്, 5 μl hace2-hrp intl Hrp Dillutess ബഫർ ഉപയോഗിച്ച് ദുർബലമാക്കുക
ഒരു ഹേസ് 2-എച്ച്ആർപി പരിഹാരം ഉണ്ടാക്കുക.
4. 1 × കഴുകൽ പരിഹാരം തയ്യാറാക്കൽ: ഡിയോണൈസ് ചെയ്ത അല്ലെങ്കിൽ വാറ്റിയെടുത്ത വെള്ളമുള്ള 20 × വാഷ് ലായനി ലയിപ്പിക്കുക
1:19 ന്റെ വോളിയം അനുപാതം. ഉദാഹരണത്തിന്, 380 മില്ലി ഉപയോഗിച്ച് 20 × വാഷ് ലായനി ലയിപ്പിക്കുക അല്ലെങ്കിൽ
1 × വാഷ് ലായനി 400 മില്ലി സമ്പാദിക്കാൻ വാറ്റിയെടുത്ത വെള്ളം.
പതനംപരീക്ഷണ നടപടിക്രമംപതനം
1. പ്രത്യേക ട്യൂബുകളിൽ, തയ്യാറാക്കിയ hace2-hrp പരിഹാരത്തിന്റെ 120μL.
2. ഓരോ ട്യൂബിലും 6 μl കാലിബ്രേറ്റർമാർ, അജ്ഞാത സാമ്പിളുകൾ, ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണം എന്നിവ ചേർത്ത് നന്നായി ഇളക്കുക.
3. ഘട്ടം 2 ൽ തയ്യാറാക്കിയ ഓരോ മിശ്രിതം അനുബന്ധ മൈക്രോ ടെംപ്ലേറ്റ് കിണറുകളിലേക്ക് മാറ്റുക
മുൻകൂട്ടി നിശ്ചയിച്ച ടെസ്റ്റ് കോൺഫിഗറേഷൻ.
3. പ്ലേറ്റ് സീലറും 30 മിനിറ്റ് 37 ° C ഉം ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുക.
4. പ്ലേറ്റ് സീലർ നീക്കം ചെയ്ത് പ്ലേറ്റ് കഴുകുക, ഒരു മൂല്യം നാല് തവണ
5. കപ്പൽ കഴുകുന്നതിനുശേഷം കിണറുകളിൽ ദ്രാവകം നീക്കംചെയ്യുന്നതിന് പേപ്പർ ടവലിൽ പ്ലേറ്റ് ടാപ്പുചെയ്യുക.
6. ഓരോന്നായി 100 μL പരിഹാരം ചേർത്ത് പ്ലേറ്റ് ഇരുട്ടിൽ 20 - 25 ° C ന് 20 മിനിറ്റ് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുക.
7. പ്രതികരണം നിർത്താൻ ഓരോ മണിക്കൂറിനും 50 μl സ്റ്റോപ്പ് ലായനി ചേർക്കുക.
8. മൈക്രോപേംപ് റീഡറിൽ 450 എൻഎം 10 മിനിറ്റിനുള്ളിൽ (630nm]
ഉയർന്ന കൃത്യത പ്രകടനത്തിന് ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു).