ടെസ്റ്റ്സീലാബ്സ് SARS-CoV-2 ന്യൂട്രലൈസിംഗ് ആന്റിബോഡി ഡിറ്റക്ഷൻ കിറ്റ് (ELISA)
ഹൃസ്വ വിവരണം:
SARS-CoV-2 ന്യൂട്രലൈസിംഗ് ആന്റിബോഡി ടെസ്റ്റ് കാസറ്റ് ഒരു ദ്രുത ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫിക് ഇമ്മ്യൂണോഅസേ ആണ്. കൊറോണ വൈറസ് രോഗം 2019 നെതിരെ ന്യൂട്രലൈസിംഗ് ആന്റിബോഡികളുടെ ഗുണപരമായ കണ്ടെത്തലിനായി ഈ പരിശോധന രൂപകൽപ്പന ചെയ്തിരിക്കുന്നു. ഇത് മനുഷ്യന്റെ മുഴുവൻ രക്തം, സെറം അല്ലെങ്കിൽ പ്ലാസ്മ സാമ്പിളുകൾക്കൊപ്പം ഉപയോഗിക്കാം. മനുഷ്യ ആന്റി-നോവൽ കൊറോണ വൈറസ് ന്യൂട്രലൈസിംഗ് ആന്റിബോഡി ടൈറ്ററുകളുടെ അളവ് വിലയിരുത്തുന്നതിന് ഈ പരിശോധന ഒരു സഹായമായി വർത്തിക്കുന്നു.
 ദ്രുത ഫലങ്ങൾ: മിനിറ്റുകൾക്കുള്ളിൽ ലാബ്-കൃത്യം | ലാബ്-ഗ്രേഡ് കൃത്യത: വിശ്വസനീയവും വിശ്വസനീയവും |
| എവിടെയും പരീക്ഷിക്കുക: ലാബ് സന്ദർശനം ആവശ്യമില്ല. | സാക്ഷ്യപ്പെടുത്തിയ ഗുണനിലവാരം: 13485, CE, Mdsap കംപ്ലയിന്റ് |
| ലളിതവും ലളിതവും: ഉപയോഗിക്കാൻ എളുപ്പം, തടസ്സമില്ല | ആത്യന്തിക സൗകര്യം: വീട്ടിൽ സുഖകരമായി പരീക്ഷിക്കുക |
【 [എഴുത്ത്]തത്വം】
SARS-CoV-2 ന്യൂട്രലൈസിംഗ് ആന്റിബോഡി ഡിറ്റക്ഷൻ കിറ്റ് മത്സരാധിഷ്ഠിത ELISA രീതിശാസ്ത്രത്തെ അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ളതാണ്.
പ്യൂരിഫൈഡ് റിസപ്റ്റർ ബൈൻഡിംഗ് ഡൊമെയ്ൻ (RBD), വൈറൽ സ്പൈക്ക് (S) പ്രോട്ടീനിൽ നിന്നുള്ള പ്രോട്ടീൻ, ഹോസ്റ്റ് സെൽ എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച്
റിസപ്റ്റർ ACE2, വൈറസ്-ഹോസ്റ്റ് ന്യൂട്രലൈസിംഗ് പ്രതിപ്രവർത്തനത്തെ അനുകരിക്കുന്നതിനാണ് ഈ പരിശോധന രൂപകൽപ്പന ചെയ്തിരിക്കുന്നത്.
കാലിബ്രേറ്ററുകൾ, ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണങ്ങൾ, സെറം അല്ലെങ്കിൽ പ്ലാസ്മ സാമ്പിളുകൾ എന്നിവ നേർപ്പിക്കലിൽ വ്യക്തിഗതമായി നന്നായി കലർത്തിയിരിക്കുന്നു.
ചെറിയ ട്യൂബുകളിൽ hACE2-HRP കൺജഗേറ്റ് അടങ്ങിയ ബഫർ. തുടർന്ന് മിശ്രിതങ്ങൾ അതിലേക്ക് മാറ്റുന്നു.
ഇമോബിലൈസ്ഡ് റീകോമ്പിനന്റ് SARS-CoV-2 RBD ഫ്രാഗ്മെന്റ് (RBD) അടങ്ങിയ മൈക്രോപ്ലേറ്റ് കിണറുകൾ
ഇൻകുബേഷൻ. 30 മിനിറ്റ് ഇൻകുബേഷനിൽ, കാലിബ്രേറ്ററുകളിലെ ആർബിഡി നിർദ്ദിഷ്ട ആന്റിബോഡി, ക്യുസി,
കിണറുകളിൽ നിശ്ചലമാക്കിയ RBD യുടെ നിർദ്ദിഷ്ട ബൈൻഡിംഗിനായി സാമ്പിളുകൾ hACE2-HRP യുമായി മത്സരിക്കും.
ഇൻകുബേഷൻ സമയത്ത്, ബന്ധനമില്ലാത്ത hACE2-HRP കൺജഗേറ്റ് നീക്കം ചെയ്യുന്നതിനായി കിണറുകൾ 4 തവണ കഴുകുന്നു.
പിന്നീട് TMB ചേർത്ത് മുറിയിലെ താപനിലയിൽ 20 മിനിറ്റ് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുന്നു, ഇത് ഒരു
നീല നിറം. 1N HCl ചേർക്കുന്നതോടെ വർണ്ണ വികസനം നിർത്തുന്നു, ആഗിരണം കുറയുന്നു.
സ്പെക്ട്രോഫോട്ടോമെട്രിക് ആയി 450 nm ൽ അളക്കുന്നു. രൂപപ്പെടുന്ന നിറത്തിന്റെ തീവ്രത ആനുപാതികമാണ്
എൻസൈമിന്റെ അളവ്, കൂടാതെ അതേ രീതിയിൽ പരിശോധിക്കുന്ന മാനദണ്ഡങ്ങളുടെ അളവുമായി വിപരീതമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു.
നൽകിയിരിക്കുന്ന കാലിബ്രേറ്ററുകൾ രൂപപ്പെടുത്തിയ കാലിബ്രേഷൻ വക്രവുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുന്നതിലൂടെ, സാന്ദ്രത
അജ്ഞാത സാമ്പിളിലെ ന്യൂട്രലൈസിംഗ് ആന്റിബോഡികൾ പിന്നീട് കണക്കാക്കുന്നു.
【 [എഴുത്ത്]ആവശ്യമായ വസ്തുക്കൾ, പക്ഷേ നൽകിയിട്ടില്ല】
1. വാറ്റിയെടുത്ത അല്ലെങ്കിൽ ഡീയോണൈസ് ചെയ്ത വെള്ളം
2. കൃത്യതയുള്ള പൈപ്പറ്റുകൾ: 10μL, 100μL, 200μL, 1 മില്ലി
3. ഡിസ്പോസിബിൾ പൈപ്പറ്റ് നുറുങ്ങുകൾ
4. 450nm-ൽ റീഡിംഗ് ആബ്സോർബൻസ് ശേഷിയുള്ള മൈക്രോപ്ലേറ്റ് റീഡർ.
5. ആഗിരണം ചെയ്യുന്ന പേപ്പർ
6. ഗ്രാഫ് പേപ്പർ
7. വോർടെക്സ് മിക്സർ അല്ലെങ്കിൽ തത്തുല്യം
【 [എഴുത്ത്]മാതൃകാ ശേഖരണവും സംഭരണവും】
1. K2-EDTA അടങ്ങിയ ട്യൂബുകളിൽ ശേഖരിച്ച സെറം, പ്ലാസ്മ സാമ്പിളുകൾ ഈ കിറ്റിനായി ഉപയോഗിക്കാം.
2. സാമ്പിളുകൾ അടച്ചുവയ്ക്കണം, പരിശോധനയ്ക്ക് മുമ്പ് 2 °C - 8 °C താപനിലയിൽ 48 മണിക്കൂർ വരെ സൂക്ഷിക്കാം.
കൂടുതൽ കാലം (6 മാസം വരെ) സൂക്ഷിച്ചിരിക്കുന്ന സാമ്പിളുകൾ പരിശോധനയ്ക്ക് മുമ്പ് -20 °C-ൽ ഒരിക്കൽ മാത്രമേ ഫ്രീസ് ചെയ്യാവൂ.
ആവർത്തിച്ചുള്ള ഫ്രീസ്-ഥാ സൈക്കിളുകൾ ഒഴിവാക്കുക.
പ്രോട്ടോക്കോൾ
【 [എഴുത്ത്]റീജന്റ് തയ്യാറാക്കൽ】
1. എല്ലാ റിയാജന്റുകളും റഫ്രിജറേറ്ററിൽ നിന്ന് പുറത്തെടുത്ത് ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് മുറിയിലെ താപനിലയിലേക്ക് തിരികെ വരാൻ അനുവദിക്കണം.
(20° മുതൽ 25°C വരെ) ഉപയോഗിച്ച ഉടൻ തന്നെ എല്ലാ റിയാക്ടറുകളും റഫ്രിജറേറ്ററിൽ സൂക്ഷിക്കുക.
2. എല്ലാ സാമ്പിളുകളും നിയന്ത്രണങ്ങളും ഉപയോഗിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് വോർട്ടെക്സ് ചെയ്യണം.
3. hACE2-HRP ലായനി തയ്യാറാക്കൽ: 1:51 നേർപ്പിക്കൽ അനുപാതത്തിൽ നേർപ്പിച്ച hACE2-HRP കോൺസൺട്രേറ്റ് നേർപ്പിക്കുക.
ബഫർ. ഉദാഹരണത്തിന്, 100 μL hACE2-HRP കോൺസൻട്രേറ്റ് 5.0mL HRP ഡില്യൂഷൻ ബഫറുമായി നേർപ്പിക്കുക
ഒരു hACE2-HRP ലായനി ഉണ്ടാക്കുക.
4. 1× വാഷ് ലായനി തയ്യാറാക്കൽ: 20× വാഷ് ലായനി ഡീയോണൈസ് ചെയ്തതോ വാറ്റിയെടുത്തതോ ആയ വെള്ളത്തിൽ ലയിപ്പിക്കുക.
1:19 എന്ന വോളിയം അനുപാതം. ഉദാഹരണത്തിന്, 20 മില്ലി 20× വാഷ് ലായനിയിൽ 380 മില്ലി ഡീയോണൈസ്ഡ് അല്ലെങ്കിൽ
1× വാഷ് ലായനിയുടെ 400 മില്ലി ഉണ്ടാക്കാൻ വാറ്റിയെടുത്ത വെള്ളം.
【 [എഴുത്ത്]പരീക്ഷണ നടപടിക്രമം】
1. പ്രത്യേക ട്യൂബുകളിൽ, തയ്യാറാക്കിയ hACE2-HRP ലായനിയുടെ ഏകദേശം 120μL.
2. ഓരോ ട്യൂബിലും 6 μL കാലിബ്രേറ്ററുകൾ, അജ്ഞാത സാമ്പിളുകൾ, ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണങ്ങൾ എന്നിവ ചേർത്ത് നന്നായി ഇളക്കുക.
3. ഘട്ടം 2-ൽ തയ്യാറാക്കിയ ഓരോ മിശ്രിതത്തിന്റെയും 100μL അനുബന്ധ മൈക്രോപ്ലേറ്റ് കിണറുകളിലേക്ക് മാറ്റുക.
മുൻകൂട്ടി രൂപകൽപ്പന ചെയ്ത ടെസ്റ്റ് കോൺഫിഗറേഷനിലേക്ക്.
3. പ്ലേറ്റ് സീലർ കൊണ്ട് പ്ലേറ്റ് മൂടി 37°C-ൽ 30 മിനിറ്റ് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുക.
4. പ്ലേറ്റ് സീലർ നീക്കം ചെയ്ത് പ്ലേറ്റ് ഓരോ കിണറിനും ഏകദേശം 300 μL 1× വാഷ് ലായനി ഉപയോഗിച്ച് നാല് തവണ കഴുകുക.
5. കഴുകൽ ഘട്ടങ്ങൾക്ക് ശേഷം കിണറുകളിലെ ശേഷിക്കുന്ന ദ്രാവകം നീക്കം ചെയ്യാൻ പേപ്പർ ടവലിൽ പ്ലേറ്റ് ടാപ്പ് ചെയ്യുക.
6. ഓരോ കിണറിലും 100 μL TMB ലായനി ചേർത്ത് പ്ലേറ്റ് 20 - 25°C താപനിലയിൽ 20 മിനിറ്റ് ഇരുണ്ട സ്ഥലത്ത് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്യുക.
7. പ്രതിപ്രവർത്തനം നിർത്താൻ ഓരോ കിണറിലും 50 μL സ്റ്റോപ്പ് സൊല്യൂഷൻ ചേർക്കുക.
8. 450 nm-ൽ മൈക്രോപ്ലേറ്റ് റീഡറിലെ ആഗിരണം 10 മിനിറ്റിനുള്ളിൽ വായിക്കുക (ഉപകരണമായി 630nm)
ഉയർന്ന കൃത്യതയുള്ള പ്രകടനത്തിന് ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു).