Testsealabs SARS-CoV-2-nøytraliserende antistoffdeteksjonssett (ELISA)
Kort beskrivelse:
SARS-CoV-2-nøytraliserende antistofftestkassetten er en hurtigkromatografisk immunanalyse. Denne analysen er utviklet for kvalitativ deteksjon av nøytraliserende antistoffer mot koronavirussykdom 2019. Den kan brukes med humane fullblods-, serum- eller plasmaprøver. Testen fungerer som et hjelpemiddel for å evaluere nivåene av humane antistofftitre mot det nye koronaviruset.
 Raske resultater: Laboratorienøyaktig på få minutter | Presisjon i laboratoriekvalitet: Pålitelig og pålitelig |
| Test hvor som helst: Ingen laboratoriebesøk nødvendig | Sertifisert kvalitet: 13485, CE, Mdsap-kompatibel |
| Enkel og strømlinjeformet: Brukervennlig, null problemer | Ultimat bekvemmelighet: Test komfortabelt hjemme |
【PRINSIPP】
SARS-CoV-2-nøytraliserende antistoffdeteksjonssettet er basert på konkurrerende ELISA-metodikk.
Ved bruk av renset reseptorbindingsdomene (RBD), protein fra virusspikeproteinet (S) og vertscellen
reseptor ACE2, er denne testen utformet for å etterligne den nøytraliserende interaksjonen mellom virus og vert.
Kalibratorer, kvalitetskontroller og serum- eller plasmaprøver blandes godt individuelt i fortynning.
buffer som inneholder hACE2-HRP-konjugat alikvotert i små rør. Deretter overføres blandingene i
mikroplatebrønnene som inneholder immobilisert rekombinant SARS-CoV-2 RBD-fragment (RBD) for
inkubasjon. I løpet av den 30 minutter lange inkubasjonen ble det RBD-spesifikke antistoffet i kalibratorene, QC og
prøvene vil konkurrere med hACE2-HRP om spesifikk binding til RBD immobilisert i brønnene. Etter
Under inkubasjonen vaskes brønnene fire ganger for å fjerne ubundet hACE2-HRP-konjugat. En løsning av
TMB tilsettes deretter og inkuberes i 20 minutter ved romtemperatur, noe som resulterer i utviklingen av en
blå farge. Fargeutviklingen stoppes ved tilsetning av 1N HCl, og absorbansen er
målt spektrofotometrisk ved 450 nm. Intensiteten til den dannede fargen er proporsjonal med
mengden enzym som er tilstede, og er omvendt relatert til mengden standarder som analyseres på samme måte.
Gjennom sammenligning med kalibreringskurven dannet av de medfølgende kalibratorene, ble konsentrasjonen av
Deretter beregnes nøytraliserende antistoffer i den ukjente prøven.
【NØDVENDIGE MATERIALER, MEN IKKE LEVERERT】
1. Destillert eller avionisert vann
2. Presisjonspipetter: 10 μL, 100 μL, 200 μL og 1 ml
3. Engangs pipettespisser
4. Mikroplateleser som kan lese absorbans ved 450 nm.
5. Absorberende papir
6. Millimeterpapir
7. Vortex-mikser eller tilsvarende
【PRØVEINNSAMLING OG OPPBEVARING】
1. Serum- og plasmaprøver samlet i rør som inneholder K2-EDTA kan brukes til dette settet.
2. Prøvene skal lukkes med kork og kan oppbevares i opptil 48 timer ved 2–8 °C før analyse.
Prøver som oppbevares over lengre tid (opptil 6 måneder) bør kun fryses én gang ved -20 °C før analyse.
Unngå gjentatte fryse-tine-sykluser.
PROTOKOLL
【Reagensforberedelse】
1. Alle reagenser må tas ut av kjøleskapet og få romtemperatur før bruk.
(20–25 °C). Oppbevar alle reagenser i kjøleskapet umiddelbart etter bruk.
2. Alle prøver og kontroller skal vortexes før bruk.
3. Tilberedning av hACE2-HRP-løsning: Fortynn hACE2-HRP-konsentratet i fortynningsforholdet 1:51 med Dilution
Buffer. For eksempel, fortynn 100 μL hACE2-HRP-konsentrat med 5,0 ml HRP-fortynningsbuffer til
Lag en hACE2-HRP-løsning.
4. Tilberedning av 1× vaskeløsning: Fortynn 20× vaskeløsningen med avionisert eller destillert vann med en
volumforhold på 1:19. For eksempel, fortynn 20 ml av 20× vaskeløsning med 380 ml avionisert eller
destillert vann for å lage 400 ml 1× vaskeløsning.
【Testprosedyre】
1. Fordel 120 μL av den klargjorte hACE2-HRP-løsningen i separate rør.
2. Tilsett 6 μL kalibratorer, ukjente prøver og kvalitetskontroller i hvert rør og bland godt.
3. Overfør 100 μL av hver blanding som ble fremstilt i trinn 2 til tilsvarende mikroplatebrønner i henhold til
til forhåndsdesignet testkonfigurasjon.
3. Dekk platen med plateforsegler og inkuber ved 37 °C i 30 minutter.
4. Fjern plateforsegleren og vask platen fire ganger med omtrent 300 μL 1× vaskeløsning per brønn.
5. Bank platen lett mot et papirhåndkle for å fjerne gjenværende væske i brønnene etter vasketrinnene.
6. Tilsett 100 μL TMB-løsning til hver brønn og inkuber platen i mørket ved 20–25 °C i 20 minutter.
7. Tilsett 50 μL stoppløsning i hver brønn for å stoppe reaksjonen.
8. Les av absorbansen i mikroplateleseren ved 450 nm innen 10 minutter (630 nm som tilbehør er
anbefalt for ytelse med høyere presisjon).