Набор Testsealabs для обнаружения нейтрализующих антител к SARS-CoV-2 (ИФА)
Краткое описание:
Тест-кассета для определения нейтрализующих антител к SARS-CoV-2 — это быстрый хроматографический иммуноферментный анализ. Этот анализ предназначен для качественного выявления нейтрализующих антител к коронавирусу 2019 года. Его можно использовать с образцами цельной крови, сыворотки или плазмы крови человека. Тест служит для оценки титров нейтрализующих антител к новому коронавирусу.
 Быстрые результаты: лабораторная точность за считанные минуты | Точность лабораторного уровня: надежность и заслуживающая доверия |
| Тестируйте где угодно: посещение лаборатории не требуется | Сертифицированное качество: 13485, CE, соответствует MDSAP |
| Простота и удобство: простота использования, никаких хлопот | Максимальное удобство: проводите тестирование дома с комфортом |
【ПРИНЦИП】
Набор для выявления нейтрализующих антител к SARS-CoV-2 основан на методологии конкурентного ИФА.
Используя очищенный домен связывания рецептора (RBD), белок из вирусного шиповидного белка (S) и клетку-хозяина
рецептора ACE2, этот тест предназначен для имитации нейтрализующего взаимодействия вируса с хозяином.
Калибраторы, контроли качества и образцы сыворотки или плазмы по отдельности тщательно смешиваются в разбавленном виде.
Буфер, содержащий конъюгат hACE2-HRP, аликвотируется в небольшие пробирки. Затем смеси переносятся в
лунки микропланшета, содержащие иммобилизованный рекомбинантный фрагмент RBD SARS-CoV-2 (RBD) для
Инкубация. В течение 30-минутной инкубации специфические антитела к RBD в калибраторах, контроль качества и
Образцы будут конкурировать с hACE2-HRP за специфическое связывание с RBD, иммобилизованным в лунках. После
После инкубации лунки промывают 4 раза для удаления несвязавшегося конъюгата hACE2-HRP. Раствор
Затем добавляют ТМБ и инкубируют в течение 20 минут при комнатной температуре, что приводит к развитию
Синий цвет. Развитие окраски останавливается добавлением 1N HCl, а поглощение
измерено спектрофотометрически при 450 нм. Интенсивность образующегося цвета пропорциональна
количество присутствующего фермента обратно пропорционально количеству стандартов, исследованных таким же образом.
Путем сравнения с калибровочной кривой, сформированной предоставленными калибраторами, была определена концентрация
Затем рассчитывается количество нейтрализующих антител в неизвестном образце.
【МАТЕРИАЛЫ НЕОБХОДИМЫЕ, НО НЕ ПРЕДОСТАВЛЕННЫЕ】
1. Дистиллированная или деионизированная вода
2. Прецизионные пипетки: 10 мкл, 100 мкл, 200 мкл и 1 мл
3. Одноразовые наконечники для пипеток
4. Микропланшетный ридер, способный измерять поглощение при 450 нм.
5. Впитывающая бумага
6. Миллиметровая бумага
7. Вихревой смеситель или эквивалент
【СБОР И ХРАНЕНИЕ ОБРАЗЦОВ】
1. Для этого набора можно использовать образцы сыворотки и плазмы, собранные в пробирки, содержащие K2-ЭДТА.
2. Образцы должны быть закрыты и могут храниться до 48 часов при температуре от 2 °C до 8 °C перед анализом.
Образцы, хранящиеся в течение длительного времени (до 6 месяцев), следует замораживать при температуре -20 °C только один раз перед анализом.
Избегайте повторных циклов замораживания-оттаивания.
ПРОТОКОЛ
【Подготовка реагентов】
1. Все реагенты необходимо вынуть из холодильника и дать им нагреться до комнатной температуры перед использованием.
(20–25 °C). Храните все реагенты в холодильнике сразу после использования.
2. Все образцы и контроли перед использованием следует тщательно перемешать.
3. Приготовление раствора hACE2-HRP: разведите концентрат hACE2-HRP в соотношении 1:51 с помощью разбавителя.
Буфер. Например, разведите 100 мкл концентрата hACE2-HRP 5,0 мл буфера для разведения HRP, чтобы
приготовьте раствор hACE2-HRP.
4. Приготовление 1× промывочного раствора: разбавьте 20× промывочный раствор деионизированной или дистиллированной водой с
Соотношение объёмов 1:19. Например, разбавьте 20 мл 20-кратного промывочного раствора 380 мл деионизированной или
дистиллированной воды для приготовления 400 мл однократного промывочного раствора.
【Процедура испытания】
1. В отдельные пробирки отберите по 120 мкл приготовленного раствора hACE2-HRP.
2. Добавьте в каждую пробирку по 6 мкл калибраторов, неизвестных образцов, контролей качества и тщательно перемешайте.
3. Перенесите 100 мкл каждой смеси, приготовленной на шаге 2, в соответствующие лунки микропланшета согласно
к заранее разработанной тестовой конфигурации.
3. Накройте планшет герметиком и инкубируйте при температуре 37°C в течение 30 минут.
4. Извлеките герметик для планшетов и промойте планшет примерно по 300 мкл однократного промывочного раствора на лунку в течение четырех раз.
5. Постучите планшетом по бумажному полотенцу, чтобы удалить остатки жидкости в лунках после промывки.
6. Добавьте в каждую лунку по 100 мкл раствора ТМБ и инкубируйте планшет в темноте при температуре 20–25 °C в течение 20 минут.
7. Добавьте в каждую лунку 50 мкл стоп-раствора, чтобы остановить реакцию.
8. Измерьте поглощение в микропланшетном ридере при 450 нм в течение 10 минут (630 нм в качестве принадлежности).
рекомендуется для более высокой точности).