Súprava na detekciu neutralizačných protilátok proti SARS-CoV-2 (ELISA) od Testsealabs
Stručný popis:
Kazetový test na neutralizačné protilátky proti SARS-CoV-2 je rýchly chromatografický imunotest. Tento test je určený na kvalitatívnu detekciu neutralizačných protilátok proti koronavírusovému ochoreniu 2019. Môže sa použiť so vzorkami plnej ľudskej krvi, séra alebo plazmy. Test slúži ako pomôcka pri hodnotení hladín titrov neutralizačných protilátok proti novému koronavírusu u ľudí.
 Rýchle výsledky: Laboratórne presné za pár minút | Laboratórna presnosť: Spoľahlivý a dôveryhodný |
| Testujte kdekoľvek: Nie je potrebná návšteva laboratória | Certifikovaná kvalita: 13485, CE, v súlade s Mdsap |
| Jednoduché a zefektívnené: Ľahko sa používa, bez problémov | Maximálne pohodlie: Testujte pohodlne doma |
【PRINCÍP】
Súprava na detekciu neutralizačných protilátok proti SARS-CoV-2 je založená na kompetitívnej metodike ELISA.
Použitím purifikovanej domény viažucej receptor (RBD), proteínu z proteínu vírusového hrotu (S) a hostiteľskej bunky
receptor ACE2, tento test je navrhnutý tak, aby napodobňoval neutralizačnú interakciu medzi vírusom a hostiteľom.
Kalibrátory, kontroly kvality a vzorky séra alebo plazmy sa jednotlivo dobre premiešajú v riedenom roztoku.
pufor obsahujúci konjugát hACE2-HRP rozdelený na alikvotné podiely do malých skúmaviek. Zmesi sa potom prenesú do
jamky mikroplatničky obsahujúce imobilizovaný rekombinantný RBD fragment (RBD) SARS-CoV-2 pre
inkubácia. Počas 30-minútovej inkubácie sa špecifická protilátka RBD v kalibrátoroch, QC a
Vzorky budú súťažiť s hACE2-HRP o špecifickú väzbu na RBD imobilizovaný v jamkách. Po
inkubácie sa jamky 4-krát premyjú, aby sa odstránil nenaviazaný konjugát hACE2-HRP. Roztok
Potom sa pridá TMB a inkubuje sa 20 minút pri izbovej teplote, čo vedie k vývoju
modrá farba. Vývoj farby sa zastaví pridaním 1N HCl a absorbancia je
merané spektrofotometricky pri 450 nm. Intenzita vzniknutej farby je úmerná
množstvo prítomného enzýmu a je nepriamo úmerné množstvu štandardov testovaných rovnakým spôsobom.
Porovnaním s kalibračnou krivkou vytvorenou dodanými kalibrátormi sa určí koncentrácia
potom sa vypočíta množstvo neutralizačných protilátok v neznámej vzorke.
【POTREBNÉ MATERIÁLY, KTORÉ NIE SÚ SÚČASŤOU】
1. Destilovaná alebo deionizovaná voda
2. Presné pipety: 10 μl, 100 μl, 200 μl a 1 ml
3. Jednorazové špičky pipiet
4. Čítačka mikrotitračných platničiek schopná odčítať absorbanciu pri 450 nm.
5. Savý papier
6. Milimetrový papier
7. Vortexový mixér alebo ekvivalent
【ODBER A SKLADOVANIE VZORIEK】
1. V tejto súprave možno použiť vzorky séra a plazmy odobraté do skúmaviek obsahujúcich K2-EDTA.
2. Vzorky by mali byť uzavreté a pred analýzou sa môžu skladovať až 48 hodín pri teplote 2 °C – 8 °C.
Vzorky uchovávané dlhší čas (do 6 mesiacov) by sa mali pred analýzou zmraziť iba raz pri teplote -20 °C.
Vyhnite sa opakovaným cyklom zmrazovania a rozmrazovania.
PROTOKOL
【Príprava činidla】
1. Všetky činidlá musia byť pred použitím vybraté z chladničky a nechané zohriať na izbovú teplotu.
(20 °C až 25 °C). Všetky činidlá po použití ihneď uchovávajte v chladničke.
2. Všetky vzorky a kontroly by sa mali pred použitím premiešať vo vortexovom miešadle.
3. Príprava roztoku hACE2-HRP: Koncentrát hACE2-HRP zrieďte roztokom v pomere 1:51
Pufer. Napríklad zrieďte 100 μl koncentrátu hACE2-HRP s 5,0 ml riediaceho pufra HRP na
pripravte roztok hACE2-HRP.
4. Príprava 1× premývacieho roztoku: Zrieďte 20× premývací roztok deionizovanou alebo destilovanou vodou s
objemovom pomere 1:19. Napríklad zrieďte 20 ml 20× premývacieho roztoku s 380 ml deionizovaného alebo
destilovanej vody na prípravu 400 ml 1× premývacieho roztoku.
【Skúšobný postup】
1. Do samostatných skúmaviek odoberte alikvotné podiely 120 μl pripraveného roztoku hACE2-HRP.
2. Do každej skúmavky pridajte 6 μl kalibrátorov, neznámych vzoriek a kontrol kvality a dobre premiešajte.
3. Preneste 100 μl každej zmesi pripravenej v kroku 2 do príslušných jamiek mikroplatničky podľa pokynov.
podľa vopred navrhnutej konfigurácie testu.
3. Platňu prikryte tesniacou fóliou a inkubujte pri teplote 37 °C počas 30 minút.
4. Odstráňte tesniaci kryt platne a platňu štyrikrát premyte približne 300 μl premývacieho roztoku 1× na jamku.
5. Po premytí poklepte platňou o papierovú utierku, aby ste odstránili zvyšnú tekutinu z jamiek.
6. Do každej jamky pridajte 100 μl roztoku TMB a inkubujte platňu v tme pri teplote 20 – 25 °C počas 20 minút.
7. Do každej jamky pridajte 50 μl zastavovacieho roztoku, aby ste zastavili reakciu.
8. Odčítajte absorbanciu na čítačke mikrotitračných platničiek pri 450 nm do 10 minút (630 nm je príslušenstvom).
odporúčané pre výkon s vyššou presnosťou).