SARS-COV-2 நடுநிலைப்படுத்தும் ஆன்டிபாடி கண்டறிதல் கிட் (ELISA)
【கொள்கை】
SARS-COV-2 நடுநிலைப்படுத்தும் ஆன்டிபாடி கண்டறிதல் கிட் போட்டி ELISA முறையை அடிப்படையாகக் கொண்டது.
சுத்திகரிக்கப்பட்ட ஏற்பி பிணைப்பு டொமைன் (ஆர்.பி.டி), வைரஸ் ஸ்பைக் (எஸ்) புரதம் மற்றும் ஹோஸ்ட் கலத்திலிருந்து புரதம் பயன்படுத்துதல்
ஏற்பி ACE2, இந்த சோதனை வைரஸ்-ஹோஸ்ட் நடுநிலைப்படுத்தும் தொடர்புகளைப் பிரதிபலிக்கும் வகையில் வடிவமைக்கப்பட்டுள்ளது.
அளவுத்திருத்தங்கள், தரக் கட்டுப்பாடுகள் மற்றும் சீரம் அல்லது பிளாஸ்மா மாதிரிகள் தனித்தனியாக கலக்கப்படுகின்றன
சிறிய குழாய்களில் HACE2-HRP கான்ஜுகேட் அலிகோட் கொண்ட இடையக. பின்னர் கலவைகள் மாற்றப்படுகின்றன
அசையாத மறுசீரமைப்பு SARS-COV-2 RBD துண்டு (RBD) கொண்ட மைக்ரோ பிளேட் கிணறுகள்
அடைகாக்கும். 30 நிமிட அடைகாக்கும் போது, அளவுத்திருத்தங்கள், QC மற்றும்
கிணறுகளில் அசையாத RBD ஐ குறிப்பிட்ட பிணைப்புக்காக மாதிரிகள் HACE2-HRP உடன் போட்டியிடும். பிறகு
வரம்பற்ற HACE2-HRP இணைப்பை அகற்ற, அடைகாக்கும், கிணறுகள் 4 முறை கழுவப்படுகின்றன. ஒரு தீர்வு
டி.எம்.பி பின்னர் சேர்க்கப்பட்டு அறை வெப்பநிலையில் 20 நிமிடங்கள் அடைகாக்கும், இதன் விளைவாக a இன் வளர்ச்சி ஏற்படுகிறது
நீல நிறம். 1N HCL ஐ சேர்ப்பதன் மூலம் வண்ண வளர்ச்சி நிறுத்தப்படுகிறது, மேலும் உறிஞ்சுதல்
ஸ்பெக்ட்ரோஃபோட்டோமெட்ரிக் முறையில் 450 என்.எம். உருவான வண்ணத்தின் தீவிரம் விகிதாசாரமாகும்
இருக்கும் நொதியின் அளவு, அதே வழியில் மதிப்பிடப்பட்ட தரங்களின் அளவோடு நேர்மாறாக தொடர்புடையது.
வழங்கப்பட்ட அளவுத்திருத்திகளால் உருவாக்கப்பட்ட அளவுத்திருத்த வளைவுடன் ஒப்பிடுவதன் மூலம், செறிவு
அறியப்படாத மாதிரியில் ஆன்டிபாடிகளை நடுநிலையாக்குவது பின்னர் கணக்கிடப்படுகிறது.
【தேவையான ஆனால் வழங்கப்படாத பொருட்கள்】
1. வடிகட்டிய அல்லது டீயோனைஸ் செய்யப்பட்ட நீர்
2. துல்லிய பைப்பெட்டுகள்: 10μl, 100μl, 200μl மற்றும் 1 mL
3. செலவழிப்பு பைப்பேட் உதவிக்குறிப்புகள்
4. 450nm இல் உறிஞ்சுதலைப் படிக்கக்கூடிய மைக்ரோ பிளேட் ரீடர்.
5. உறிஞ்சக்கூடிய காகிதம்
6. வரைபட காகிதம்
7. சுழல் கலவை அல்லது அதற்கு சமமான
【மாதிரி சேகரிப்பு மற்றும் சேமிப்பு】
1. K2-EDTA கொண்ட குழாய்களில் சேகரிக்கப்பட்ட சீரம் மற்றும் பிளாஸ்மா மாதிரிகள் இந்த கிட்டுக்கு பயன்படுத்தப்படலாம்.
2. மாதிரிகள் மூடியிருக்க வேண்டும் மற்றும் மதிப்பீடு செய்வதற்கு முன் 48 மணி நேரம் 2 ° C - 8 ° C க்கு சேமிக்கப்படலாம்.
நீண்ட நேரம் (6 மாதங்கள் வரை) வைத்திருக்கும் மாதிரிகள் மதிப்பீட்டிற்கு முன் -20 ° C க்கு ஒரு முறை மட்டுமே உறைந்திருக்க வேண்டும்.
மீண்டும் மீண்டும் முடக்கம்-கரை சுழற்சிகளைத் தவிர்க்கவும்.
நெறிமுறை
【மறுஉருவாக்கம்】
1. அனைத்து உலைகளும் குளிரூட்டலில் இருந்து வெளியே எடுத்து, பயன்பாட்டிற்கு முன் அறை வெப்பநிலைக்கு திரும்ப அனுமதிக்க வேண்டும்
(20 ° முதல் 25 ° C வரை). பயன்பாட்டிற்குப் பிறகு உடனடியாக குளிர்சாதன பெட்டியில் உள்ள அனைத்து உலைகளையும் சேமிக்கவும்.
2. அனைத்து மாதிரிகள் மற்றும் கட்டுப்பாடுகள் பயன்பாட்டிற்கு முன் சுழல் செய்யப்பட வேண்டும்.
3. HACE2-HRP தீர்வு தயாரிப்பு: HACE2-HRP செறிவை 1: 51 நீர்த்த விகிதத்தில் நீர்த்துப்போகச் செய்யுங்கள்
இடையக. எடுத்துக்காட்டாக, 100 μL HACE2-HRP செறிவை 5.0 மில்லி HRP நீர்த்த இடையகத்துடன் நீர்த்துப்போகச் செய்யுங்கள்
HACE2-HRP தீர்வை உருவாக்குங்கள்.
4. 1 × கழுவும் தீர்வு தயாரிப்பு: 20 × கழுவும் கரைசலை டீயோனைஸ் செய்யப்பட்ட அல்லது வடிகட்டிய நீரில் நீர்த்துப்போகவும்
தொகுதி விகிதம் 1:19. எடுத்துக்காட்டாக, 20 மில்லி 20 × கழுவும் கரைசலை 380 மில்லி டீயோனைஸ் செய்யப்பட்ட அல்லது நீர்த்துப்போகச் செய்யுங்கள்
1 × கழுவும் கரைசலில் 400 மில்லி செய்ய வடிகட்டிய நீர்.
【சோதனை செயல்முறை】
1. தனி குழாய்களில், தயாரிக்கப்பட்ட HACE2-HRP கரைசலின் அலிகோட் 120μl.
2. ஒவ்வொரு குழாயிலும் 6 μL அளவுத்திருத்தங்கள், அறியப்படாத மாதிரிகள், தரக் கட்டுப்பாடுகள் சேர்த்து நன்கு கலக்கவும்.
3. படி 2 இல் தயாரிக்கப்பட்ட ஒவ்வொரு கலவையின் 100μl ஐ மாற்றவும் தொடர்புடைய மைக்ரோ பிளேட் கிணறுகளாக மாற்றவும்
முன்னரே தீர்மானிக்கப்பட்ட சோதனை உள்ளமைவுக்கு.
3. தட்டு சீலருடன் தட்டை மூடி, 37 ° C க்கு 30 நிமிடங்கள் அடைக்கவும்.
4. தட்டு சீலரை அகற்றி, நான்கு முறை ஒரு நலனுக்கு 1 × கழுவும் கரைசலில் சுமார் 300 μL உடன் தட்டைக் கழுவவும்.
5. படிகளை கழுவிய பின் கிணறுகளில் எஞ்சியிருக்கும் திரவத்தை அகற்ற காகித துண்டில் தட்டைத் தட்டவும்.
6. ஒவ்வொரு கிணற்றுக்கும் 100 μL TMB கரைசலைச் சேர்த்து, தட்டை 20 - 25 ° C க்கு 20 நிமிடங்கள் இருட்டில் அடைக்கவும்.
7. எதிர்வினையை நிறுத்த ஒவ்வொரு கிணற்றுக்கும் 50 μl நிறுத்தக் கரைசலைச் சேர்க்கவும்.
8. மைக்ரோ பிளேட் ரீடரில் உறிஞ்சுதலை 10 நிமிடங்களுக்குள் 450 என்.எம்
அதிக துல்லியமான செயல்திறனுக்கு பரிந்துரைக்கப்படுகிறது).