டெஸ்ட்சீலாப்ஸ் SARS-CoV-2 நியூட்ராலைசிங் ஆன்டிபாடி கண்டறிதல் கருவி (ELISA)
குறுகிய விளக்கம்:
SARS-CoV-2 நியூட்ராலைசிங் ஆன்டிபாடி டெஸ்ட் கேசட் என்பது ஒரு விரைவான குரோமடோகிராஃபிக் இம்யூனோஅஸ்ஸே ஆகும். இந்த மதிப்பீடு கொரோனா வைரஸ் நோய் 2019 க்கு எதிரான நடுநிலைப்படுத்தும் ஆன்டிபாடிகளின் தரமான கண்டறிதலுக்காக வடிவமைக்கப்பட்டுள்ளது. இது மனித முழு இரத்தம், சீரம் அல்லது பிளாஸ்மா மாதிரிகளுடன் பயன்படுத்தப்படலாம். மனித ஆன்டி-நாவல் கொரோனா வைரஸ் நியூட்ராலைசிங் ஆன்டிபாடி டைட்டர்களின் அளவை மதிப்பிடுவதில் இந்த சோதனை ஒரு உதவியாக செயல்படுகிறது.
 விரைவான முடிவுகள்: நிமிடங்களில் ஆய்வக-துல்லியமானவை | ஆய்வக தர துல்லியம்: நம்பகமானது & நம்பகமானது |
| எங்கும் சோதனை: ஆய்வக வருகை தேவையில்லை. | சான்றளிக்கப்பட்ட தரம்: 13485, CE, Mdsap இணக்கமானது |
| எளிமையானது & நெறிப்படுத்தப்பட்டவை: பயன்படுத்த எளிதானது, தொந்தரவு இல்லாதது | உச்சகட்ட வசதி: வீட்டிலேயே சௌகரியமாக சோதிக்கவும். |
【 அறிவியல்கொள்கை】
SARS-CoV-2 நியூட்ராலைசிங் ஆன்டிபாடி கண்டறிதல் கருவி, போட்டி ELISA முறையை அடிப்படையாகக் கொண்டது.
சுத்திகரிக்கப்பட்ட ஏற்பி பிணைப்பு டொமைன் (RBD), வைரஸ் ஸ்பைக் (S) புரதத்திலிருந்து புரதம் மற்றும் ஹோஸ்ட் செல் ஆகியவற்றைப் பயன்படுத்துதல்
ஏற்பி ACE2, இந்த சோதனை வைரஸ்-ஹோஸ்ட் நடுநிலைப்படுத்தும் தொடர்புகளைப் பிரதிபலிக்கும் வகையில் வடிவமைக்கப்பட்டுள்ளது.
அளவீட்டுக் கருவிகள், தரக் கட்டுப்பாடுகள் மற்றும் சீரம் அல்லது பிளாஸ்மா மாதிரிகள் தனித்தனியாக நீர்த்தலில் நன்கு கலக்கப்படுகின்றன.
hACE2-HRP இணைபொருள் கொண்ட இடையகம் சிறிய குழாய்களில் பிரிக்கப்படுகிறது. பின்னர் கலவைகள் உள்ளே மாற்றப்படுகின்றன.
அசைவற்ற மறுசீரமைப்பு SARS-CoV-2 RBD துண்டு (RBD) கொண்ட மைக்ரோபிளேட் கிணறுகள்
30 நிமிட அடைகாக்கும் போது, அளவீட்டு கருவிகளில் உள்ள RBD குறிப்பிட்ட ஆன்டிபாடி, QC மற்றும்
கிணறுகளில் அசையாமல் இருக்கும் RBD-ஐ குறிப்பிட்ட பிணைப்புக்காக மாதிரிகள் hACE2-HRP உடன் போட்டியிடும்.
அடைகாக்கும் போது, கிணறுகள் 4 முறை கழுவப்பட்டு, கட்டுப்படாத hACE2-HRP கான்ஜுகேட் நீக்கப்படுகிறது.
பின்னர் TMB சேர்க்கப்பட்டு அறை வெப்பநிலையில் 20 நிமிடங்கள் அடைகாக்கப்படுகிறது, இதன் விளைவாக ஒரு
நீல நிறம். 1N HCl சேர்ப்பதன் மூலம் நிற வளர்ச்சி நிறுத்தப்படுகிறது, மேலும் உறிஞ்சுதல்
நிறமாலை ஒளி அளவியல் ரீதியாக 450 nm இல் அளவிடப்படுகிறது. உருவாக்கப்பட்ட நிறத்தின் தீவிரம் விகிதாசாரமாகும்
தற்போதுள்ள நொதியின் அளவு, மற்றும் அதே வழியில் மதிப்பிடப்பட்ட தரநிலைகளின் அளவிற்கு நேர்மாறாக தொடர்புடையது.
வழங்கப்பட்ட அளவுத்திருத்திகளால் உருவாக்கப்பட்ட அளவுத்திருத்த வளைவுடன் ஒப்பிடுவதன் மூலம், செறிவு
பின்னர் தெரியாத மாதிரியில் நடுநிலையாக்கும் ஆன்டிபாடிகள் கணக்கிடப்படுகின்றன.
【 அறிவியல்தேவையான பொருட்கள் ஆனால் வழங்கப்படவில்லை】
1. காய்ச்சி வடிகட்டிய அல்லது அயனியாக்கம் நீக்கப்பட்ட நீர்
2. துல்லியமான பைப்பெட்டுகள்: 10μL, 100μL, 200μL மற்றும் 1 மிலி
3. தூக்கி எறியக்கூடிய பைப்பெட் குறிப்புகள்
4. 450nm இல் உறிஞ்சுதலைப் படிக்கும் திறன் கொண்ட மைக்ரோபிளேட் ரீடர்.
5. உறிஞ்சும் காகிதம்
6. வரைபடத் தாள்
7. சுழல் கலவை அல்லது அதற்கு சமமான
【 அறிவியல்மாதிரி சேகரிப்பு மற்றும் சேமிப்பு】
1. K2-EDTA கொண்ட குழாய்களில் சேகரிக்கப்பட்ட சீரம் மற்றும் பிளாஸ்மா மாதிரிகளை இந்த கருவிக்குப் பயன்படுத்தலாம்.
2. மாதிரிகள் மூடி வைக்கப்பட வேண்டும், மேலும் ஆய்வுக்கு முன் 2 °C - 8 °C வெப்பநிலையில் 48 மணி நேரம் வரை சேமிக்கப்படலாம்.
நீண்ட காலத்திற்கு (6 மாதங்கள் வரை) சேமித்து வைக்கப்பட்ட மாதிரிகள், ஆய்வுக்கு முன் -20 °C க்கு ஒரு முறை மட்டுமே உறைய வைக்கப்பட வேண்டும்.
மீண்டும் மீண்டும் உறைதல்-உருகுதல் சுழற்சிகளைத் தவிர்க்கவும்.
நெறிமுறை
【 அறிவியல்வினைப்பொருள் தயாரிப்பு】
1. அனைத்து வினைப்பொருட்களும் குளிர்சாதன பெட்டியில் இருந்து வெளியே எடுக்கப்பட்டு, பயன்படுத்துவதற்கு முன்பு அறை வெப்பநிலைக்குத் திரும்ப அனுமதிக்கப்பட வேண்டும்.
(20° முதல் 25°C வரை) பயன்பாட்டிற்குப் பிறகு உடனடியாக அனைத்து வினையாக்கிகளையும் குளிர்சாதன பெட்டியில் சேமிக்கவும்.
2. அனைத்து மாதிரிகள் மற்றும் கட்டுப்பாடுகள் பயன்படுத்துவதற்கு முன் சுழல வேண்டும்.
3. hACE2-HRP கரைசல் தயாரிப்பு: hACE2-HRP செறிவை 1:51 நீர்த்த விகிதத்தில் நீர்த்தத்துடன் நீர்த்துப்போகச் செய்யவும்.
தாங்கல். எடுத்துக்காட்டாக, 100 μL hACE2-HRP செறிவை 5.0mL HRP நீர்த்த தாங்கலுடன் நீர்த்துப்போகச் செய்யுங்கள்
ஒரு hACE2-HRP கரைசலை உருவாக்கவும்.
4. 1× கழுவும் கரைசல் தயாரிப்பு: 20× கழுவும் கரைசலை அயனியாக்கம் செய்யப்பட்ட அல்லது காய்ச்சி வடிகட்டிய நீரில் நீர்த்துப்போகச் செய்யுங்கள்.
1:19 என்ற கன அளவு விகிதம். உதாரணமாக, 20 மிலி 20× கழுவும் கரைசலை 380 மிலி அயனியாக்கம் செய்யப்பட்ட அல்லது
1× கழுவும் கரைசலில் 400 மிலி தயாரிக்க காய்ச்சி வடிகட்டிய நீர்.
【 அறிவியல்சோதனை முறை】
1. தனித்தனி குழாய்களில், தயாரிக்கப்பட்ட hACE2-HRP கரைசலில் சுமார் 120μL.
2. ஒவ்வொரு குழாயிலும் 6 μL அளவீட்டுக் கருவிகள், தெரியாத மாதிரிகள், தரக் கட்டுப்பாடுகள் ஆகியவற்றைச் சேர்த்து நன்கு கலக்கவும்.
3. படி 2 இல் தயாரிக்கப்பட்ட ஒவ்வொரு கலவையிலும் 100μL ஐ தொடர்புடைய மைக்ரோபிளேட் கிணறுகளுக்கு மாற்றவும்.
முன் வடிவமைக்கப்பட்ட சோதனை உள்ளமைவுக்கு.
3. பிளேட் சீலரைக் கொண்டு தட்டை மூடி, 37°C வெப்பநிலையில் 30 நிமிடங்கள் அடைகாக்கவும்.
4. தட்டு சீலரை அகற்றி, ஒவ்வொரு கிணற்றிலும் தோராயமாக 300 μL 1× கழுவும் கரைசலைக் கொண்டு தட்டை நான்கு முறை கழுவவும்.
5. கழுவிய பின் கிணறுகளில் எஞ்சியிருக்கும் திரவத்தை அகற்ற, காகிதத் துண்டில் தட்டைத் தட்டவும்.
6. ஒவ்வொரு கிணற்றிலும் 100 μL TMB கரைசலைச் சேர்த்து, தட்டை 20 - 25°C வெப்பநிலையில் 20 நிமிடங்கள் இருண்ட இடத்தில் அடைக்கவும்.
7. வினையை நிறுத்த ஒவ்வொரு கிணற்றிலும் 50 μL ஸ்டாப் கரைசலைச் சேர்க்கவும்.
8. 450 nm இல் மைக்ரோபிளேட் ரீடரில் உறிஞ்சுதலை 10 நிமிடங்களுக்குள் படிக்கவும் (துணைப் பொருளாக 630nm)
அதிக துல்லிய செயல்திறனுக்கு பரிந்துரைக்கப்படுகிறது).