SARS-COV-2 తటస్థీకరణ యాంటీబాడీ డిటెక్షన్ కిట్ (ELISA)
【సూత్రం】
SARS-COV-2 తటస్థీకరించే యాంటీబాడీ డిటెక్షన్ కిట్ పోటీ ELISA పద్దతిపై ఆధారపడి ఉంటుంది.
శుద్ధి చేసిన రిసెప్టర్ బైండింగ్ డొమైన్ (RBD), వైరల్ స్పైక్ (లు) ప్రోటీన్ మరియు హోస్ట్ సెల్ నుండి ప్రోటీన్ ఉపయోగించడం
రిసెప్టర్ ACE2, ఈ పరీక్ష వైరస్-హోస్ట్ న్యూట్రలైజింగ్ పరస్పర చర్యను అనుకరించటానికి రూపొందించబడింది.
అమరికలు, నాణ్యత నియంత్రణలు మరియు సీరం లేదా ప్లాస్మా నమూనాలు వ్యక్తిగతంగా పలుచనలో బాగా కలిపాయి
చిన్న గొట్టాలలో HACE2-HRP కంజుగేట్ సంయోగం కలిగి ఉన్న బఫర్. అప్పుడు మిశ్రమాలు బదిలీ చేయబడతాయి
స్థిరమైన పున omb సంయోగం చేయబడిన పున omb సంయోగ SARS-COV-2 RBD ఫ్రాగ్మెంట్ (RBD) కలిగిన మైక్రోప్లేట్ బావులు
పొదిగే. 30 నిమిషాల పొదిగే సమయంలో, కాలిబ్రేటర్లలో RBD నిర్దిష్ట యాంటీబాడీ, QC మరియు
బావులలో స్థిరీకరించబడిన RBD ని నిర్దిష్ట బంధించడానికి నమూనాలు HACE2-HRP తో పోటీపడతాయి. తరువాత
పొదిగే, బావులు అన్‌బౌండ్ హస్ 2-హెచ్‌ఆర్‌పి కంజుగేట్‌ను తొలగించడానికి 4 సార్లు కడుగుతారు. యొక్క పరిష్కారం
అప్పుడు TMB జోడించబడుతుంది మరియు గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద 20 నిమిషాలు పొదిగేది, దీని ఫలితంగా a యొక్క అభివృద్ధి జరుగుతుంది
నీలం రంగు. 1N HCL చేరికతో రంగు అభివృద్ధి ఆగిపోతుంది, మరియు శోషణ ఉంటుంది
450 nm వద్ద స్పెక్ట్రోఫోటోమెట్రిక్‌గా కొలుస్తారు. ఏర్పడిన రంగు యొక్క తీవ్రత దానికి అనులోమానుపాతంలో ఉంటుంది
ఎంజైమ్ మొత్తం ఉంది మరియు అదే విధంగా పరిశీలించిన ప్రమాణాల మొత్తానికి విలోమ సంబంధం కలిగి ఉంటుంది.
అందించిన కాలిబ్రేటర్లచే ఏర్పడిన క్రమాంకనం వక్రతతో పోల్చడం ద్వారా, యొక్క ఏకాగ్రత
తెలియని నమూనాలో ప్రతిరోధకాలను తటస్తం చేయడం అప్పుడు లెక్కించబడుతుంది.
【పదార్థాలు అవసరం కానీ అందించబడలేదు】
1. స్వేదన లేదా డీయోనైజ్డ్ నీరు
2. ప్రెసిషన్ పైపెట్స్: 10μl, 100μl, 200μl మరియు 1 mL
3. పునర్వినియోగపరచలేని పైపెట్ చిట్కాలు
4. మైక్రోప్లేట్ రీడర్ 450nm వద్ద శోషణను చదవగల సామర్థ్యం కలిగి ఉంటుంది.
5. శోషక కాగితం
6. గ్రాఫ్ పేపర్
7. వోర్టెక్స్ మిక్సర్ లేదా సమానమైనది
【నమూనా సేకరణ మరియు నిల్వ】
1. K2-EDTA కలిగిన గొట్టాలలో సేకరించిన సీరం మరియు ప్లాస్మా నమూనాలను ఈ కిట్ కోసం ఉపయోగించవచ్చు.
2. నమూనాలను కప్పాలి మరియు పరీక్షించడానికి ముందు 2 ° C - 8 ° C వద్ద 48 గంటల వరకు నిల్వ చేయవచ్చు.
పరీక్షకు ముందు -20 ° C వద్ద ఒక్కసారి మాత్రమే ఎక్కువ సమయం (6 నెలల వరకు) జరిగే నమూనాలను స్తంభింపజేయాలి.
పదేపదే ఫ్రీజ్-థా చక్రాలను నివారించండి.
ప్రోటోకాల్
【కారకం తయారీ】
1. అన్ని కారకాలను శీతలీకరణ నుండి తీయాలి మరియు ఉపయోగం ముందు గది ఉష్ణోగ్రతకు తిరిగి రావడానికి అనుమతించాలి
(20 ° నుండి 25 ° C). అన్ని కారకాలను రిఫ్రిజిరేటర్‌లో ఉపయోగించిన తర్వాత వెంటనే సేవ్ చేయండి.
2. అన్ని నమూనాలు మరియు నియంత్రణలను ఉపయోగం ముందు సుడిగుండం చేయాలి.
3. HACE2-HRP సొల్యూషన్ తయారీ: HACE2-HRP గా concent తను 1: 51 పలుచన నిష్పత్తిలో పలుచనతో పలుచన చేయండి
బఫర్. ఉదాహరణకు, 100 μl HACE2-HRP ను 5.0ml HRP పలుచన బఫర్‌తో కరిగించండి
HACE2-HRP పరిష్కారం చేయండి.
4. 1 × వాష్ ద్రావణ తయారీ: 20 × వాష్ ద్రావణాన్ని డీయోనైజ్డ్ లేదా స్వేదనజలంతో కరిగించండి
వాల్యూమ్ నిష్పత్తి 1:19. ఉదాహరణకు, 380 మి.లీ డీయోనైజ్డ్ లేదా
1 × వాష్ ద్రావణం 400 మి.లీ చేయడానికి స్వేదనజలం.
【పరీక్ష విధానం】
1. ప్రత్యేక గొట్టాలలో, సిద్ధం చేసిన HACE2-HRP ద్రావణం యొక్క ఆల్కాట్ 120μl.
2. 6 μl కాలిబ్రేటర్లు, తెలియని నమూనాలు, ప్రతి గొట్టంలో నాణ్యత నియంత్రణలు వేసి బాగా కలపాలి.
3. దశ 2 లో తయారుచేసిన ప్రతి మిశ్రమంలో 100μl ను సంబంధిత మైక్రోప్లేట్ బావులుగా బదిలీ చేయండి
ముందే రూపొందించిన పరీక్ష కాన్ఫిగరేషన్.
3. ప్లేట్ సీలర్‌తో ప్లేట్‌ను కప్పండి మరియు 37 ° C వద్ద 30 నిమిషాలు పొదిగించండి.
4. ప్లేట్ సీలర్‌ను తీసివేసి, నాలుగుసార్లు వెల్ కోసం సుమారు 300 μl 1 × వాష్ ద్రావణంతో ప్లేట్‌ను కడగాలి.
5. స్టెప్స్ కడిగిన తరువాత బావులలో అవశేష ద్రవాన్ని తొలగించడానికి పేపర్ టవల్ మీద ప్లేట్ నొక్కండి.
.
7. ప్రతిచర్యను ఆపడానికి ప్రతి బావికి 50 μl స్టాప్ ద్రావణాన్ని జోడించండి.
8. మైక్రోప్లేట్ రీడర్‌లో శోషణను 10 నిమిషాల్లో 450 ఎన్ఎమ్ వద్ద చదవండి (అనుబంధంగా 630 ఎన్ఎమ్
అధిక ఖచ్చితత్వ పనితీరు కోసం సిఫార్సు చేయబడింది).