טעסטסילאַבס SARS-CoV-2 נויטראַליזירנדיק אַנטיבאָדי דעטעקציע קיט (ELISA)
קורצע באַשרייַבונג:
די SARS-CoV-2 נויטראַליזירנדיקע אַנטיבאָדי טעסט קאַסעטע איז אַ שנעל כראָמאַטאָגראַפֿיש יממונאָאַסיי. די טעסט איז דיזיינד פֿאַר די קוואַליטאַטיווע דעטעקציע פון נויטראַליזירנדיקע אַנטיבאָדיעס קעגן קאָראָנאַווירוס קרענק 2019. עס קען ווערן גענוצט מיט מענטשלעך גאַנץ בלוט, סערום, אָדער פּלאַזמע ספּעסאַמאַנז. די טעסט דינט ווי אַ הילף אין עוואַלואַטינג די לעוועלס פון מענטשלעך אַנטי-נייַ קאָראָנאַווירוס נויטראַליזירנדיק אַנטיבאָדי טיטערס.
 שנעלע רעזולטאַטן: לאַבאָראַטאָריע-גענוי אין מינוטן | לאַבאָראַטאָריע-גראַד פּרעציזיע: פאַרלאָזלעך און טראַסטווערדי |
| טעסט ערגעץ: קיין לאַבאָראַטאָריע באַזוך איז נישט נויטיק | סערטיפיצירטע קוואַליטעט: 13485, CE, Mdsap קאָמפּליאַנט |
| פּשוט און פֿאַרשטאַרקט: גרינג צו נוצן, קיין פּראָבלעמען | אולטימאַטיווע באַקוועמלעכקייט: טעסט באַקוועם אין שטוב |
【פּרינציפּ】
דער SARS-CoV-2 נויטראַליזירנדיקער אַנטיבאָדי דעטעקציע קיט איז באַזירט אויף קאָמפּעטיטיווע ELISA מעטאָדאָלאָגיע.
ניצנדיק פּיוראַפייד רעצעפּטאָר ביינדינג דאָמעין (RBD), פּראָטעין פֿון די וויראַל ספּייק (S) פּראָטעין און די באַלעבאָס צעל
רעצעפּטאָר ACE2, דעם טעסט איז דיזיינד צו נאָכמאַכן די ווירוס-באַלעבאָס נויטראַליזירנדיק ינטעראַקציע.
קאַליבראַטאָרן, קוואַליטעט קאָנטראָלן, און סערום אָדער פּלאַזמע מוסטערן ווערן אינדיווידועל גוט געמישט אין דיילושאַן
באַפער מיט hACE2-HRP קאָניוגאַט צעטיילט אין קליינע רערן. דערנאָך ווערן די געמישן איבערגעפירט אין
די מיקראָפּלאַטע וועללז וואָס אַנטהאַלטן ימאָובאַלייזד רעקאָמבינאַנט SARS-CoV-2 RBD פראַגמענט (RBD) פֿאַר
אינקובאציע. בעת די 30-מינוט אינקובאציע, די RBD ספעציפישע אנטיקערפער אין די קאליבראטארן, QC און
מוסטערן וועלן קאנקורירן מיט די hACE2-HRP פאר ספעציפישע בינדונג צו די RBD אימאביליזירט אין די וועללס. נאכדעם
די אינקובאציע, די וועללעך ווערן געוואשן 4 מאל צו באזייטיגן נישט-געבונדענע hACE2-HRP קאניוגאט. א לייזונג פון
TMB ווערט דעמאָלט צוגעגעבן און אינקובירט פֿאַר 20 מינוט ביי צימער טעמפּעראַטור, וואָס רעזולטירט אין דער אַנטוויקלונג פון אַ
בלויע קאליר. די קאליר אנטוויקלונג ווערט אפגעשטעלט מיטן צולייגן 1N HCl, און די אבזארבאנץ ווערט
געמאסטן ספּעקטראָפאָטאָמעטריש ביי 450 נאַנאָמעטער. די אינטענסיטעט פון דער קאָליר וואָס ווערט געשאַפֿן איז פּראָפּאָרציאָנעל צו דער
די סומע פון ענזיים וואָס איז פאָרשטעלן, און איז ינווערסלי שייַכות צו דער סומע פון סטאַנדאַרדס וואָס זענען געפּrüפֿט געוואָרן אויף דעם זעלבן וועג.
דורך פארגלייך מיט דער קאליבראציע קורווע געשאפן דורך די צוגעשטעלטע קאליבראטארן, די קאנצענטראציע פון
נויטראליזירנדיקע אנטיקערפערס אין דעם אומבאַקאַנטן מוסטער ווערט דעמאָלט אויסגערעכנט.
【מאַטעריאַלן וואָס זענען נויטיק אָבער נישט צוגעשטעלט】
1. דיסטילירט אדער דעיאָניזירט וואַסער
2. פּרעציזיע פּיפּעטן: 10μL, 100μL, 200μL און 1 mL
3. איין-מאל-ניצלעכע פּיפּעטע שפּיצן
4. מיקראָפּלאַטע לייענער וואָס קען לייענען אַבסאָרבאַנס ביי 450 נם.
5. אַבזאָרביִרנדיק פּאַפּיר
6. גראַפיק פּאַפּיר
7. וואָרטעקס מיקסער אָדער עקוויוואַלענט
【מוסטער זאַמלונג און סטאָרידזש】
1. סערום און פּלאַזמע מוסטערן געזאַמלט אין טובעס וואָס אַנטהאַלטן K2-EDTA קענען געניצט ווערן פֿאַר דעם קיט.
2. ספּעסאַמאַנען זאָלן זיין פֿאַרמאַכט מיט אַ דעקל און מעגן זיין אויפֿגעהיט ביז 48 שעה ביי 2 °C - 8 °C איידער זיי ווערן דורכגעפּרובירט.
ספּעסאַמאַנען וואָס ווערן געהאַלטן פֿאַר אַ לענגערע צייט (ביז 6 חדשים) זאָלן ווערן פֿאַרפֿרוירן בלויז איין מאָל ביי -20 °C איידער דעם טעסט.
פֿאַרמײַדן איבערגעחזרטע פֿאַרפֿרירן-אויטאָ ציקלען.
פּראָטאָקאָל
【רעאַגענט צוגרייטונג】
1. אַלע רעאַגענטן מוזן אַרויסגענומען ווערן פֿון קילער און דערלויבט ווערן צוריקצוקומען צו צימער טעמפּעראַטור איידער נוצן.
(20° ביז 25°C). האַלט אַלע רעאַגענטן אין פרידזשידער גלייך נאָך נוצן.
2. אַלע מוסטערן און קאָנטראָלן זאָלן ווערן געוואָרטעקסט איידער נוצן.
3. hACE2-HRP לייזונג צוגרייטונג: פארדיןען hACE2-HRP קאנצענטראטן ביי א 1:51 פארדיןונג פראפארציע מיט פארדיןונג
באַפער. למשל, פֿאַרדיןען 100 μL פון hACE2-HRP קאָנצענטראַט מיט 5.0mL פון HRP פֿאַרדיןען באַפער צו
מאַכן אַ hACE2-HRP לייזונג.
4. 1× וואַש לייזונג צוגרייטונג: פֿאַרדיןען די 20× וואַש לייזונג מיט דעיאָניזירט אָדער דיסטילירט וואַסער מיט אַ
א וואָלומען פאַרהעלטעניש פון 1:19. למשל, פֿאַרדיןען 20 מל פון 20× וואַש לייזונג מיט 380 מל פון דעיאָניזירט אָדער
דיסטילירט וואַסער צו מאַכן 400 מל פון 1× וואַש לייזונג.
【טעסט פּראָצעדור】
1. אין באַזונדערע טובעס, אַליקוואָט 120μL פון דער צוגעגרייטער hACE2-HRP לייזונג.
2. לייגט צו 6 μL פון קאליבראטארן, אומבאקאנטע מוסטערן, קוואַליטעט קאָנטראָלן אין יעדן טוב און מישט גוט.
3. טראַנספערירן 100μL פון יעדער געמיש צוגעגרייט אין שריט 2 אין קאָרעספּאָנדירנדיקע מיקראָפּלאַטע וועללז לויט
צו פאַר-דיזיינד טעסט קאָנפיגוראַציע.
3. דעקט צו דעם טעלער מיט טעלער פארזיגלער און אינקובירט ביי 37°C פאר 30 מינוט.
4. אַראָפּנעמען דעם פּלאַטע פֿאַרזיגלער און וואַשט די פּלאַטע מיט אַרום 300 μL פון 1× וואַש לייזונג פּער קוואל פֿיר מאָל.
5. קלאַפּט דעם טעלער אויף אַ פּאַפּירענעם האַנטוך צו באַזײַטיקן איבערבלייבנדיקע פליסיקייט אין די לופֿטן נאָך די וואַש-טרעטן.
6. לייגט צו 100 μL פון TMB לייזונג צו יעדן קוואל און אינקובירט די טעלער אין פינצטער ביי 20 - 25°C פאר 20 מינוט.
7. לייגט צו 50 μL פון סטאָפּ סאַלושאַן צו יעדן לאָך צו אָפּשטעלן די רעאַקציע.
8. לייענט די אַבסאָרבאַנס אין מיקראָפּלאַטע לייענער ביי 450 נם אין 10 מינוט (630 נם ווי אַקסעסאָרי איז
רעקאָמענדירט פֿאַר העכערע פּינקטלעכקייט פאָרשטעלונג).