Kit de détection des anticorps neutralisants du SARS-COV-2 (ELISA)
【PRINCIPE】
Le kit de détection d'anticorps neutralisant SARS-COV-2 est basé sur la méthodologie ELISA compétitive.
En utilisant le domaine de liaison aux récepteurs purifiés (RBD), la protéine de la (s) protéine de pointe virale et la cellule hôte
Récepteur ACE2, ce test est conçu pour imiter l'interaction neutralisante par le virus.
Les calibrateurs, les commandes de qualité et les échantillons de sérum ou de plasma sont bien mélangés individuellement en dilution
tampon contenant un conjugué HACE2-HRP aliquoté dans de petits tubes. Ensuite, les mélanges sont transférés dans
Les puits de microplaques contenant un fragment RBD SARS-CoV-2 immobilisé (RBD)
incubation. Au cours de l'incubation de 30 minutes, l'anticorps spécifique de RBD dans les calibrateurs, QC et
Les échantillons rivaliseront avec le HACE2-HRP pour une liaison spécifique de la RBD immobilisée dans les puits. Après
L'incubation, les puits sont lavés 4 fois pour éliminer le conjugué HACE2-HRP non lié. Une solution de
Le TMB est ensuite ajouté et incubé pendant 20 minutes à température ambiante, entraînant le développement d'un
couleur bleue. Le développement des couleurs est arrêté avec l'ajout de HCl 1N, et l'absorbance est
Mesuré par spectrophotométrie à 450 nm. L'intensité de la couleur formée est proportionnelle au
quantité d'enzyme présente et est inversement liée à la quantité de normes testées de la même manière.
Par comparaison avec la courbe d'étalonnage formée par les calibrateurs fournis, la concentration de
Les anticorps neutralisants dans l'échantillon inconnu sont ensuite calculés.
【Matériaux requis mais non fournis】
1. Eau distillée ou déionisée
2. Pipettes de précision: 10 μl, 100 μl, 200 μl et 1 ml
3. Conseils de pipette jetables
4. Lecteur de microplaques capable de lire l'absorbance à 450 nm.
5. Papier absorbant
6. Papier graphique
7. Mélangeur vortex ou équivalent
【Collection et stockage des spécimens】
1. Des échantillons de sérum et de plasma prélevés dans des tubes contenant K2-EDTA peuvent être utilisés pour ce kit.
2. Les échantillons doivent être plafonnés et peuvent être stockés jusqu'à 48 heures à 2 ° C - 8 ° C avant le dosage.
Les échantillons maintenus pendant une période plus longue (jusqu'à 6 mois) ne doivent être congelés qu'une seule fois à -20 ° C avant le dosage.
Évitez les cycles répétés de congélation.
PROTOCOLE
【Préparation de réactif】
1. Tous les réactifs doivent être retirés de la réfrigération et autorisés à revenir à la température ambiante avant utilisation
(20 ° à 25 ° C). Enregistrez tous les réactifs dans le réfrigérateur rapidement après utilisation.
2. Tous les échantillons et contrôles doivent être vortexés avant utilisation.
3. Préparation de la solution HACE2-HRP: Concentré dilué HACE2-HRP à 1: 51 Ratio de dilution avec dilution
Tampon. Par exemple, diluer 100 μL de concentré HACE2-HRP avec 5,0 ml de tampon de dilution HRP à
Faites une solution HACE2-HRP.
4. 1 × Solution de lavage Préparation: diluer la solution de lavage 20 × avec de l'eau désionisée ou distillée avec un
Ratio de volume de 1:19. Par exemple, diluer 20 ml de solution de lavage 20 × avec 380 ml de déionisé ou
Eau distillée pour faire 400 ml de solution de lavage 1 ×.
【Procédure de test】
1. Dans des tubes séparés, aliquote 120 μl de la solution HACE2-HRP préparée.
2. Ajouter 6 μL de calibrateurs, échantillons inconnus, commandes de qualité dans chaque tube et bien mélanger.
3. Transférer 100 μl de chaque mélange préparé à l'étape 2 dans des puits de microplaques correspondants en fonction
à la configuration de test prédéfinie.
3. Couvrir la plaque avec un scellant de plaque et incuber à 37 ° C pendant 30 minutes.
4. Retirez le scellant de la plaque et lavez la plaque avec environ 300 μL de solution de lavage 1 × par puits pour quatre fois.
5. Appuyez sur la plaque sur du papier serviette pour retirer le liquide résiduel dans les puits après avoir lavé les marches.
6. Ajouter 100 μL de solution TMB à chaque puits et incuber la plaque dans l'obscurité à 20 à 25 ° C pendant 20 minutes.
7. Ajouter 50 μL de solution d'arrêt à chaque puits pour arrêter la réaction.
8. Lisez l'absorbance dans le lecteur de microplaques à 450 nm en 10 minutes (630 nm comme accessoire est
recommandé pour des performances de précision plus élevées).