Testseabs SARS-CoV-2中和抗体検出キット(ELISA)
【原理】
SARS-CoV-2 中和抗体検出キットは競合 ELISA 法に基づいています。
精製された受容体結合ドメイン(RBD)、ウイルススパイク(S)タンパク質、および宿主細胞由来のタンパク質を用いて
受容体 ACE2 を標的としたこのテストは、ウイルスと宿主の中和相互作用を模倣するように設計されています。
キャリブレーター、品質管理、血清または血漿サンプルは、希釈して個別によく混合されます。
hACE2-HRPコンジュゲートを含む緩衝液を小管に分注する。その後、混合物を
固定化された組み換えSARS-CoV-2 RBDフラグメント(RBD)を含むマイクロプレートウェル
インキュベーション。30分間のインキュベーション中に、キャリブレーター、QC、および
サンプルはhACE2-HRPと競合し、ウェル内に固定されたRBDに特異的に結合する。
インキュベーション後、ウェルを4回洗浄し、結合していないhACE2-HRP複合体を除去する。
TMBを添加し、室温で20分間インキュベートすると、
青色。1N HClを加えると発色は止まり、吸光度は
450 nmで分光光度計で測定。形成される色の強度は、
存在する酵素の量であり、同様に分析された標準物質の量と反比例関係にあります。
提供されたキャリブレーターによって作成された検量線との比較により、
次に、未知のサンプル中の中和抗体を計算します。
【必要な材料が提供されない】
1. 蒸留水または脱イオン水
2. 精密ピペット:10μL、100μL、200μL、1mL
3. 使い捨てピペットチップ
4. 450nmでの吸光度を読み取ることができるマイクロプレートリーダー。
5. 吸収紙
6. グラフ用紙
7. ボルテックスミキサーまたは同等のもの
【標本の収集と保管】
1. K2-EDTA を含むチューブに採取された血清および血漿サンプルをこのキットに使用できます。
2. 検体は蓋をして、分析前に 2 °C ~ 8 °C で最大 48 時間保存することができます。
長期間(最長 6 か月)保管する標本は、分析前に 1 回だけ -20 °C で凍結する必要があります。
凍結と解凍の繰り返しを避けてください。
プロトコル
【試薬の準備】
1. すべての試薬は使用前に冷蔵庫から取り出し、室温に戻してください。
(20~25℃)。使用後はすべての試薬を速やかに冷蔵庫に保管してください。
2. すべてのサンプルとコントロールは使用前にボルテックスする必要があります。
3. hACE2-HRP溶液の調製:hACE2-HRP濃縮液を希釈液で1:51の希釈率で希釈する。
緩衝液。例えば、hACE2-HRP濃縮液100μLをHRP希釈緩衝液5.0mLで希釈して、
hACE2-HRP溶液を作ります。
4. 1×洗浄液の調製:20×洗浄液を脱イオン水または蒸留水で希釈し、
1:19の容量比で希釈します。例えば、20mLの20倍洗浄液を380mLの脱イオン水または
蒸留水を加えて400 mLの1×洗浄溶液を作ります。
【テスト手順】
1. 別のチューブに、調製したhACE2-HRP溶液120μLを分注します。
2. 各チューブにキャリブレーター、未知のサンプル、品質管理を 6 μL 加え、よく混ぜます。
3. ステップ2で調製した各混合物100μLを、対応するマイクロプレートウェルに移します。
事前に設計されたテスト構成に従います。
3. プレートをプレートシーラーで覆い、37°Cで30分間インキュベートします。
4. プレートシーラーを取り外し、ウェルあたり約300μLの1×洗浄液でプレートを4回洗浄します。
5. 洗浄ステップの後、プレートをペーパータオルの上で軽くたたいてウェル内の残留液を除去します。
6. 各ウェルにTMB溶液100μLを加え、プレートを暗所で20~25℃で20分間インキュベートします。
7. 各ウェルに50μLの停止液を加えて反応を停止します。
8. マイクロプレートリーダーで450 nmの吸光度を10分以内に測定する(630nmはアクセサリとして使用可能)。
より高い精度のパフォーマンスが必要な場合に推奨されます。

