ଟେଷ୍ଟସିଲାବ୍ସ SARS-CoV-2 ନିଉଟ୍ରାଲାଇଜିଂ ଆଣ୍ଟିବଡି ଚିହ୍ନଟ କିଟ୍ (ELISA)
ସଂକ୍ଷିପ୍ତ ବର୍ଣ୍ଣନା:
SARS-CoV-2 ନିରପେକ୍ଷ ଆଣ୍ଟିବଡି ପରୀକ୍ଷା କ୍ୟାସେଟ୍ ଏକ ଦ୍ରୁତ କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫିକ୍ ଇମ୍ୟୁନୋଏସେ। ଏହି ପରୀକ୍ଷା 2019 କରୋନାଭାଇରସ୍ ରୋଗ ବିରୁଦ୍ଧରେ ନିରପେକ୍ଷ ଆଣ୍ଟିବଡିର ଗୁଣାତ୍ମକ ଚିହ୍ନଟ ପାଇଁ ଡିଜାଇନ୍ କରାଯାଇଛି। ଏହାକୁ ମାନବ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ରକ୍ତ, ସିରମ୍, କିମ୍ବା ପ୍ଲାଜ୍ମା ନମୁନା ସହିତ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ। ଏହି ପରୀକ୍ଷା ମାନବ ଆଣ୍ଟି-ନୋଭେଲ୍ କରୋନାଭାଇରସ୍ ନିରପେକ୍ଷ ଆଣ୍ଟିବଡି ଟାଇଟରଗୁଡ଼ିକର ସ୍ତର ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନରେ ସାହାଯ୍ୟ କରେ।
 ଦ୍ରୁତ ଫଳାଫଳ: କିଛି ମିନିଟ୍ରେ ପରୀକ୍ଷାଗାର-ସଠିକ | ଲ୍ୟାବ-ଗ୍ରେଡ୍ ସଠିକତା: ନିର୍ଭରଯୋଗ୍ୟ ଏବଂ ବିଶ୍ୱସ୍ତ |
| ଯେକୌଣସି ସ୍ଥାନରେ ପରୀକ୍ଷା କରନ୍ତୁ: କୌଣସି ଲ୍ୟାବ ପରିଦର୍ଶନ ଆବଶ୍ୟକ ନାହିଁ | ପ୍ରମାଣିତ ଗୁଣବତ୍ତା: ୧୩୪୮୫, ସିଇ, ଏମଡିସାପ୍ ଅନୁପାଳନକାରୀ |
| ସରଳ ଏବଂ ସୁଗମ: ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ସହଜ, କୌଣସି ଅସୁବିଧା ନାହିଁ | ସର୍ବୋତ୍ତମ ସୁବିଧା: ଘରେ ଆରାମଦାୟକ ଭାବରେ ପରୀକ୍ଷା କରନ୍ତୁ |
【ନୀତି】
SARS-CoV-2 ନିଉଟ୍ରାଲାଇଜିଂ ଆଣ୍ଟିବଡି ଚିହ୍ନଟ କିଟ୍ ପ୍ରତିଯୋଗିତାମୂଳକ ELISA ପଦ୍ଧତି ଉପରେ ଆଧାରିତ।
ପ୍ୟୁରିଫାଏଡ୍ ରିସେପ୍ଟର ବାଇଣ୍ଡିଂ ଡୋମେନ୍ (RBD), ଭାଇରାଲ୍ ସ୍ପାଇକ୍ (S) ପ୍ରୋଟିନ୍ ଏବଂ ହୋଷ୍ଟ କୋଷରୁ ପ୍ରୋଟିନ୍ ବ୍ୟବହାର କରି
ରିସେପ୍ଟର ACE2, ଏହି ପରୀକ୍ଷା ଭାଇରସ-ହୋଷ୍ଟ ନିରପେକ୍ଷ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟାକୁ ଅନୁକରଣ କରିବା ପାଇଁ ଡିଜାଇନ୍ କରାଯାଇଛି।
କାଲିବ୍ରେଟର, ଗୁଣବତ୍ତା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ, ଏବଂ ସେରମ୍ କିମ୍ବା ପ୍ଲାଜ୍ମା ନମୁନାଗୁଡ଼ିକୁ ପୃଥକ ଭାବରେ ଡାଇଲ୍ୟୁସନ୍ ରେ ଭଲ ଭାବରେ ମିଶ୍ରିତ କରାଯାଏ।
ଛୋଟ ଟ୍ୟୁବରେ hACE2-HRP କଞ୍ଜୁଗେଟ୍ ଧାରଣ କରିଥିବା ବଫର। ତା'ପରେ ମିଶ୍ରଣଗୁଡ଼ିକୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ କରାଯାଏ
ପାଇଁ ସ୍ଥିର ପୁନଃସଂଯୋଜିତ SARS-CoV-2 RBD ଖଣ୍ଡ (RBD) ଧାରଣ କରିଥିବା ମାଇକ୍ରୋପ୍ଲେଟ୍ କୂପଗୁଡ଼ିକ
ଇନକ୍ୟୁବେସନ୍ । 30-ମିନିଟ୍ ଇନକ୍ୟୁବେସନ୍ ସମୟରେ, କାଲିବ୍ରାଟରରେ RBD ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଆଣ୍ଟିବଡି, QC ଏବଂ
କୂଅରେ ସ୍ଥିର ହୋଇଥିବା RBD କୁ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବାଇଣ୍ଡିଂ ପାଇଁ ନମୁନାଗୁଡ଼ିକ hACE2-HRP ସହିତ ପ୍ରତିଯୋଗିତା କରିବ। ପରେ
ଇନକ୍ୟୁବେସନ୍ ସମୟରେ, ଅବାନ୍ଧିତ hACE2-HRP କଞ୍ଜୁଗେଟ୍ ବାହାର କରିବା ପାଇଁ କୂପଗୁଡ଼ିକୁ 4 ଥର ଧୋଇ ଦିଆଯାଏ। ଏହାର ଏକ ଦ୍ରବଣ
ତା’ପରେ TMB ଯୋଡାଯାଏ ଏବଂ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ 20 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେଟେଡ୍ କରାଯାଏ, ଯାହା ଫଳରେ ଏକ
ନୀଳ ରଙ୍ଗ। 1N HCl ଯୋଗ ସହିତ ରଙ୍ଗ ବିକାଶ ବନ୍ଦ ହୋଇଯାଏ, ଏବଂ ଅବଶୋଷଣ ହୁଏ
450 nm ରେ ବର୍ଣ୍ଣାଳୀ ଫଟୋମେଟ୍ରିକ ଭାବରେ ମାପ କରାଯାଇଛି। ଗଠିତ ରଙ୍ଗର ତୀବ୍ରତା ସମାନୁପାତିକ
ଉପସ୍ଥିତ ଏନଜାଇମର ପରିମାଣ, ଏବଂ ସମାନ ଭାବରେ ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିବା ମାନକ ପରିମାଣ ସହିତ ବିପରୀତ ଭାବରେ ଜଡିତ।
ପ୍ରଦାନ କରାଯାଇଥିବା କାଲିବ୍ରେଟରମାନଙ୍କ ଦ୍ୱାରା ଗଠିତ କାଲିବ୍ରେସନ କର୍ଭ ସହିତ ତୁଳନା ମାଧ୍ୟମରେ,
ତା'ପରେ ଅଜଣା ନମୁନାରେ ନିରପେକ୍ଷ ଆଣ୍ଟିବଡି ଗଣନା କରାଯାଏ।
【ଆବଶ୍ୟକ ସାମଗ୍ରୀ କିନ୍ତୁ ପ୍ରଦାନ କରାଯାଇ ନାହିଁ】
୧. ଡିଷ୍ଟିଲ୍ କିମ୍ବା ଡିଆୟୋନାଇଜଡ୍ ପାଣି
୨. ପ୍ରିସିସନ୍ ପାଇପେଟ୍ସ: ୧୦μL, ୧୦୦μL, ୨୦୦μL ଏବଂ ୧ mL
୩. ଡିସପୋଜେବଲ୍ ପିପେଟ୍ ଟିପ୍ସ
୪. ମାଇକ୍ରୋପ୍ଲେଟ୍ ରିଡର ଯାହା ୪୫୦nm ରେ ଅବଶୋଷଣ ପଢିପାରିବ।
୫. ଅବଶୋଷକ କାଗଜ
6. ଗ୍ରାଫ୍ ପେପର
୭. ଭୋର୍ଟେକ୍ସ ମିକ୍ସର କିମ୍ବା ସମକକ୍ଷ
【ସଂଗ୍ରହ ଏବଂ ସଂରକ୍ଷଣ ନମୁନା କରନ୍ତୁ】
1. K2-EDTA ଯୁକ୍ତ ଟ୍ୟୁବରେ ସଂଗୃହିତ ସିରମ୍ ଏବଂ ପ୍ଲାଜ୍ମା ନମୁନା ଏହି କିଟ୍ ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ।
2. ନମୁନାଗୁଡ଼ିକୁ ସୀମିତ ରଖିବା ଉଚିତ ଏବଂ ପରୀକ୍ଷା ପୂର୍ବରୁ 2 °C - 8 °C ତାପମାତ୍ରାରେ 48 ଘଣ୍ଟା ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ସଂରକ୍ଷଣ କରାଯାଇପାରିବ।
ଅଧିକ ସମୟ ପାଇଁ (୬ ମାସ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ) ରଖାଯାଇଥିବା ନମୁନାଗୁଡ଼ିକୁ ପରୀକ୍ଷା ପୂର୍ବରୁ -୨୦ ଡିଗ୍ରୀ ସେଲସିୟସ୍ ତାପମାତ୍ରାରେ କେବଳ ଥରେ ଫ୍ରିଜ୍ କରାଯିବା ଉଚିତ।
ବାରମ୍ବାର ଫ୍ରିଜ୍-ଥୋ ଚକ୍ରକୁ ଏଡାନ୍ତୁ।
ପ୍ରୋଟୋକଲ୍
【ରିଏଜେଣ୍ଟ ପ୍ରସ୍ତୁତି】
1. ସମସ୍ତ ରିଏଜେଣ୍ଟଗୁଡ଼ିକୁ ରେଫ୍ରିଜରେସନରୁ ବାହାର କରି ବ୍ୟବହାର କରିବା ପୂର୍ବରୁ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାକୁ ଫେରିବାକୁ ଦିଆଯିବା ଆବଶ୍ୟକ।
(୨୦° ରୁ ୨୫° ସେଲ୍ସିୟସ୍)। ବ୍ୟବହାର ପରେ ତୁରନ୍ତ ସମସ୍ତ ରିଏଜେଣ୍ଟଗୁଡ଼ିକୁ ଫ୍ରିଜରେ ରଖନ୍ତୁ।
2. ବ୍ୟବହାର ପୂର୍ବରୁ ସମସ୍ତ ନମୁନା ଏବଂ ନିୟନ୍ତ୍ରଣଗୁଡ଼ିକୁ ଘୂର୍ଣ୍ଣନ କରାଯିବା ଉଚିତ।
3. hACE2-HRP ଦ୍ରବଣ ପ୍ରସ୍ତୁତି: 1:51 ଡାଇଲ୍ୟୁସନ୍ ସହିତ ଡାଇଲ୍ୟୁସନ୍ ଅନୁପାତରେ hACE2-HRP କନସେଣ୍ଟ୍ରେଟ୍ କୁ ପତଳା କରନ୍ତୁ।
ବଫର। ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, 100 μL hACE2-HRP କନସେଣ୍ଟ୍ରେଟ୍ କୁ 5.0mL HRP ଡିଲ୍ୟୁସନ୍ ବଫର ସହିତ ବିଶୋଧିତ କରନ୍ତୁ।
ଏକ hACE2-HRP ଦ୍ରବଣ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରନ୍ତୁ।
୪. ୧× ୱାସ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍ ପ୍ରସ୍ତୁତି: ୨୦× ୱାସ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍କୁ ଡିଆୟୋନାଇଜଡ୍ କିମ୍ବା ଡିଷ୍ଟିଲ୍ ପାଣିରେ ବିଶୋଧିତ କରନ୍ତୁ ଏବଂ
ଆୟତନ ଅନୁପାତ 1:19। ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, 20 mL 20× ୱାଶ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍ 380 mL ଡିଆୟୋନାଇଜଡ୍ କିମ୍ବା
୪୦୦ ମିଲି ୧× ୱାଶ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍ ତିଆରି କରିବା ପାଇଁ ଡିଷ୍ଟିଲେଡ୍ ପାଣି।
【ପରୀକ୍ଷା ପ୍ରକ୍ରିୟା】
1. ପୃଥକ ଟ୍ୟୁବରେ, ପ୍ରସ୍ତୁତ hACE2-HRP ଦ୍ରବଣର 120μL ସମାନ ଭାବରେ ମିଶାନ୍ତୁ।
୨. ପ୍ରତ୍ୟେକ ଟ୍ୟୁବରେ ୬ μL କାଲିବ୍ରାଟର, ଅଜଣା ନମୁନା, ଗୁଣବତ୍ତା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଯୋଡନ୍ତୁ ଏବଂ ଭଲ ଭାବରେ ମିଶ୍ରଣ କରନ୍ତୁ।
୩. ପର୍ଯ୍ୟାୟ ୨ରେ ପ୍ରସ୍ତୁତ ପ୍ରତ୍ୟେକ ମିଶ୍ରଣର ୧୦୦μL ଅନୁରୂପ ମାଇକ୍ରୋପ୍ଲେଟ୍ କୂପଗୁଡ଼ିକରେ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କରନ୍ତୁ
ପୂର୍ବ ଡିଜାଇନ୍ ହୋଇଥିବା ପରୀକ୍ଷା ବିନ୍ୟାସକୁ।
3. ପ୍ଲେଟ୍ ସିଲର୍ ସହିତ ପ୍ଲେଟ୍ ଘୋଡାନ୍ତୁ ଏବଂ 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 37°C ରେ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରନ୍ତୁ।
୪. ପ୍ଲେଟ୍ ସିଲର୍ ବାହାର କରନ୍ତୁ ଏବଂ ପ୍ରତି କୂଅରେ ପ୍ରାୟ ୩୦୦ μL ୧× ୱାସ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍ ସହିତ ପ୍ଲେଟ୍କୁ ଚାରି ଥର ଧୋଇ ଦିଅନ୍ତୁ।
୫. ଧୋଇବା ପରେ କୂଅରୁ ବଳକା ତରଳ ପଦାର୍ଥ ବାହାର କରିବା ପାଇଁ ପ୍ଲେଟକୁ କାଗଜ ଟାୱେଲରେ ଟାପ୍ କରନ୍ତୁ।
୬. ପ୍ରତ୍ୟେକ କୂପରେ ୧୦୦ μL TMB ଦ୍ରବଣ ଯୋଡ଼ନ୍ତୁ ଏବଂ ପ୍ଲେଟକୁ ଅନ୍ଧାରରେ ୨୦ - ୨୫°C ତାପମାତ୍ରାରେ ୨୦ ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ବୁଣାନ୍ତୁ।
୭. ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ବନ୍ଦ କରିବା ପାଇଁ ପ୍ରତ୍ୟେକ କୂପରେ 50 μL ଷ୍ଟପ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍ ମିଶାନ୍ତୁ।
୮. ମାଇକ୍ରୋପ୍ଲେଟ୍ ରିଡରରେ ୧୦ ମିନିଟ୍ ମଧ୍ୟରେ ୪୫୦ nm ରେ ଅବଶୋଷଣ ପଢ଼ନ୍ତୁ (ଆନୁଷଙ୍ଗିକ ଭାବରେ ୬୩୦ nm)
ଉଚ୍ଚ ସଠିକତା କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତା ପାଇଁ ସୁପାରିଶ କରାଯାଇଛି)।