Kit di rilevamento anticorpi neutralizzanti SARS-CoV-2 （ELISA)
【Uso previsto】
Il kit di rilevamento degli anticorpi neutralizzanti SARS-CoV-2 è un test immunosorbente con enzima competitivo (ELISA) destinato a rilevare qualitativa e semi-quantitativa di anticorpi neutralizzanti totali in SAR-CoV-2 nel siero umano e nel plasma. Il kit di rilevamento degli anticorpi neutralizzanti SARS-COV-2 può essere usato come aiuto per identificare le persone con una risposta immunitaria adattiva a SARS-COV-2, indicando un'infezione recente o precedente. Il kit di rilevamento degli anticorpi neutralizzanti SARS-CoV-2 non deve essere utilizzato per diagnosticare l'infezione SARS-CoV-2 acuta.
【INTRODUZIONE】
Le infezioni da coronavirus in genere inducono risposte anticorpali neutralizzanti. I tassi di sieroconversione nei pazienti Covid-19 sono rispettivamente del 50% e del 100% rispetto all'inizio dei sintomi dopo il giorno. Per presentare le conoscenze, l'anticorpo neutralizzante del virus corrispondente nel sangue è riconosciuto come bersaglio per determinare l'efficacia degli anticorpi e una maggiore concentrazione dell'anticorpo neutralizzante indica una maggiore efficacia di protezione. Il test di neutralizzazione della riduzione della placca (PRNT) è stato riconosciuto come standard di gold per rilevare anticorpi neutralizzanti. Tuttavia, a causa del suo basso rendimento e dei requisiti più elevati per il funzionamento, PRNT non è pratico per la sierodiagnosi su larga scala e la valutazione del vaccino. Il kit di rilevamento degli anticorpi neutralizzanti SARS-COV-2 si basa sul test immunosorbente (ELISA) con competizione con il saggio di immunosorbente enzimatico, che può rilevare l'anticorpo neutralizzante nel campione di sangue e accedere in particolare ai livelli di concentrazione di questo tipo di anticorpo.
【Procedura di prova】
1.In tubi separati, aliquota 120 μL della soluzione HACE2-HRP preparata.
2. Aggiungere 6 μL di calibratori, campioni sconosciuti, controlli di qualità in ciascun tubo e mescolare bene.
3. Trasferisci 100 μl di ciascuna miscela preparata nella fase 2 nei corrispondenti pozzetti di micropiastra in base alla configurazione del test predefinita.
3. Coprire la piastra con sigillante per piastra e incubare a 37 ° C per 60 minuti.
4. Rimuovere il sigillante della piastra e lavare la piastra con una soluzione approssimativa di 300 μL di 1 × WASH per pozzetto per quattro volte.
5. Prestare la piastra sul tovagliolo di carta per rimuovere il liquido residuo nei pozzi dopo il lavaggio dei gradini.
6. Aggiungere 100 μL di soluzione TMB a ciascun pozzetto e incubare la piastra al buio a 20-25 ° C per 20 minuti.
7. Aggiungere 50 μL di soluzione di arresto per ciascun pozzo per fermare la reazione.
8. Leggi l'assorbanza nel lettore di micropiastre a 450 nm entro 10 minuti (630 nm, poiché l'accessorio è raccomandato per prestazioni di precisione più elevate.
