Testsealabs SARS-CoV-2 Neutraliséierend Antikörper Detektiounskit (ELISA)
【PRINZIP】
De SARS-CoV-2 Neutralizing Antibody Detection Kit baséiert op der kompetitiver ELISA-Methodologie.
Mat Hëllef vun der gereinegter Rezeptorbindungsdomän (RBD), dem Protein vum virale Spike (S) Protein an der Wirtszell
Rezeptor ACE2, dësen Test ass entwéckelt fir d'Interaktioun tëscht Virus a Wirt ze imitéieren.
Kalibratoren, Qualitéitskontrollen a Serum- oder Plasmaproben ginn eenzel a Verdënnung gutt gemëscht.
Puffer mat hACE2-HRP-Konjugat, dat a klenge Réier aliquotéiert ass. Dann ginn d'Mëschunge transferéiert an
d'Mikroplackebrücken, déi immobiliséiert rekombinant SARS-CoV-2 RBD-Fragment (RBD) enthalen, fir
Inkubatioun. Wärend der 30-Minutte-Inkubatioun goufen den RBD-spezifeschen Antikörper an de Kalibratoren, dem QC an
D'Prouwe wäerten mam hACE2-HRP ëm spezifesch Bindung un den RBD konkurréieren, deen an de Lächer immobiliséiert ass.
Wärend der Inkubatioun ginn d'Lächer 4 Mol gewäsch fir den ongebonnenen hACE2-HRP-Konjugat ze entfernen. Eng Léisung vun
Dann gëtt den TMB derbäigesat an 20 Minutte bei Raumtemperatur inkubéiert, wouduerch eng
blo Faarf. D'Faarwentwécklung gëtt duerch d'Zousätz vun 1N HCl gestoppt, an d'Absorptioun ass
spektrophotometresch bei 450 nm gemooss. D'Intensitéit vun der entstanener Faarf ass proportional zu der
d'Quantitéit vum präsenten Enzym ass invers proportional zu der Quantitéit vun de Standarden, déi op déiselwecht Manéier analyséiert goufen.
Duerch e Verglach mat der Kalibratiounskurve, déi vun de geliwwerte Kalibratoren geformt gëtt, gouf d'Konzentratioun vun
neutraliséierend Antikörper an der onbekannter Prouf ginn dann berechent.
【NÉIDEG MATERIALER, DÉI AWER NET LEEGGEBRAUCH GINN】
1. Destilléiert oder deioniséiert Waasser
2. Präzisiounspipetten: 10μL, 100μL, 200μL an 1 mL
3. Pipettspëtze fir ewechzegeheien
4. Mikroplackelieser, deen d'Absorptioun bei 450 nm liest.
5. Absorbéierend Pabeier
6. Millimeterpabeier
7. Vortexmixer oder gläichwäerteg
【Proufsammlung a Lagerung】
1. Serum- a Plasmaproben, déi a Réier mat K2-EDTA gesammelt goufen, kënne fir dëse Kit benotzt ginn.
2. D'Prouwen solle zougemaach ginn a kënnen bis zu 48 Stonnen bei 2 °C - 8 °C gelagert ginn, ier se analyséiert ginn.
Proben, déi fir eng méi laang Zäit (bis zu 6 Méint) gelagert ginn, sollten nëmmen eemol bei -20 °C virum Analyse agefruer ginn.
Vermeit widderholl Afréier-Optau-Zyklen.
PROTOKOLL
【Reagensvirbereedung】
1. All Reagenzien mussen aus dem Frigo geholl ginn a virum Gebrauch op Raumtemperatur zréckkommen.
(20° bis 25°C). Späichert all Reagenzien direkt nom Gebrauch am Frigo.
2. All Proben a Kontrollen solle virum Gebrauch gevortext ginn.
3. Virbereedung vun der hACE2-HRP-Léisung: Verdënnt den hACE2-HRP-Konzentrat am Verdënnungsverhältnis 1:51 mat Dilution.
Puffer. Zum Beispill, verdënnt 100 μL hACE2-HRP Konzentrat mat 5,0 ml HRP Verdënnungspuffer fir
eng hACE2-HRP Léisung maachen.
4. Virbereedung vun der 1× Wäschléisung: Verdënnt d'20× Wäschléisung mat deioniséiertem oder destilléiertem Waasser mat engem
Volumenverhältnis vun 1:19. Zum Beispill, verdënnt 20 ml vun der 20× Wäschléisung mat 380 ml deioniséierter oder
destilléiert Waasser fir 400 ml vun der 1× Wäschléisung ze maachen.
【Testprozedur】
1. An eenzelnen Réiercher, aliquotéiert 120 μL vun der virbereeter hACE2-HRP Léisung.
2. Gidd 6 μL Kalibratoren, onbekannt Proben a Qualitéitskontrollen an all Réier bäi a vermëscht gutt.
3. Transferéiert 100 μL vun all Mëschung, déi am Schrëtt 2 virbereet gouf, an déi entspriechend Mikrotiterplacken, laut
op eng virgedesignt Testkonfiguratioun.
3. Deckt d'Plack mat Plate Sealer of a léisst se 30 Minutten bei 37°C inkubéieren.
4. Huelt de Plackeversiegeler eraus a wäscht d'Plack véiermol mat ongeféier 300 μL 1× Wäschléisung pro Lach.
5. Tippt d'Plack no de Wäschschrëtt op e Kichepabeier fir déi iwwereg Flëssegkeet an de Lächer ze entfernen.
6. Gidd 100 μL TMB-Léisung an all Lach a loosst d'Plack 20 Minutten am Däischteren bei 20 - 25 °C inkubéieren.
7. Füügt 50 μL Stop-Léisung an all Lach bäi, fir d'Reaktioun ze stoppen.
8. Liest d'Absorptioun am Mikrotiterlieser bei 450 nm bannent 10 Minutten (630 nm als Accessoire ass
recommandéiert fir eng méi héich Präzisiounsleistung).

