SARARS-COV-2 Neutraler an Antiebrounkitioun Kit (Elisa)
←UninhipËschter
De SARS-COV-2 Neutraleriker an Antiverkreditéierung Kit baséiert op der kompetitiver Elisodologie.
Mat purifizéierter Rezeptor bindend Domain (RBD), Protein aus dem virale Spike (en) protegéieren an der Hostzell
Empfehlung Ersatz, den Test ass entwéckelt fir de Virus-Host ze mimizéierend Interaktioun.
Kalibersegkeete, Qualitéitskontrolle, a Serum oder Plasma Proben si individuell gutt an der Dreck gemëscht
Precke mat Haken2-HRP Konjugéieren aliquotéiert a klenge Réier. Dunn sinn d'Mëschunge anzesetzen
de Mikroplate Wells mat immobiliséierte Rekombinant Sars-Cov-2 RBD Fragment (RBD) fir
Inkubatioun. Wärend der 30 Minutte Inkubatioun, d'RBD spezifesch AntiBabers an der Kalibrateuren, qc an
Echantillon konkurréiere mat der Haace2-HRP fir spezifesch Verbindung vun der RBD immobiliséiert an de Wells. Nach
D'Inkubatioun sinn d'Wells 4 Mol gewascht ginn fir unbound Haken2-hrp conjugate ze läschen. Eng Léisung vun
TMB ass dann bäigefüügt an incubéiert fir 20 Minutten bei Raumtemperatur, déi an der Entwécklung vun engem
blo Faarf. D'Faarf Entwécklung gëtt mat der Zousatz vum 1n hcl gestoppt, an den Absorptioun ass
gemooss Spriophmotometresch op 450 nm. D'Intensitéit vun der Faarf geformt ass proportional zu der
Betrag vun Enzyme präsent, an ass inverse verbonne mat dem Betrag vun der Normen op déiselwecht Manéier.
Duerch Verglach mat der Kalibratiounskurve geformt duerch déi ugebuede Kalibrateuren, d'Konzentratioun vun
Neutralizing Antiebodien am onbekannte Probe gëtt dann berechent.
←Materialien erfuerderlech awer net zur Verfügung gestalltËschter
1. Destilléiert oder deioniséiert Waasser
2. Präzis Pipetetten: 10μl, 100μl, 200μl an 1 ml
3. Diisposable Pipete Tipps
4. Microplate Reader kapabel fir d'Absorbitéit op 450nm ze liesen.
5. Absorbent Pabeier
6. Grafespabeier
7. Vortex Mixer oder gläichwäerteg
←Specimen Sammlung a SpäichereËschter
1. Serum an Plasma Proben an Tuben entstinn K2-D2 -DTa ka fir dëse Kit benotzt ginn.
2. Protimiten solle sech ofgebaut a ginn op 48 Stonnen op 2 ° C - 8 ° C virum Assay.
Prisong ofgehalen fir eng méi laang Zäit (bis zu 6 Méint sollten nëmmen eemol am20 ° c virun der Assay gefruer ginn.
Vermeit widderholl Freeze-thaw Zyklen.
Protokoll
←Rezent VirbereedungËschter
1. All Rubrik musse aus der Frigo erausgeholl ginn an erlaabt zréck an d'Raumtemperatur zréckzekommen
(20 ° bis 25 ° C). Späichert all Räicher am Frigo direkt nom Gebrauch.
2. All Proben a Kontrollen sollen d'Vortexed virum Gebrauch sinn.
3. HACE2-HRP Léisung Virbereedung: Dilute Haken2-HRP Konzentrate um 1: 51 Dilsverhältnis mat Verdünnung
Serbretzen. Zum Beispill, verdënnter 100 μl vun Haace2-HRP Konzentrat mat 5.0ml vun HRP Drecksbuffer fir
eng Haken2-HRP Léisung maachen.
4. 1 × wäschen Léisung Virbereedung: verdënntem déi 20 × Wäschlungsléisung mat destilléierte Waasser mat engem
Volumen Verhältnis vun 1:19. Zum Beispill, verdënnter 20 ml 20 × Wäsch Léisung mat 380 ml vun dioniséiert oder
Destilléiert Waasser fir 400 ml vun 1 × wäschen Léisung ze maachen.
←Test ProzedurËschter
1. An getrennten Trife, aliquote 120μl vun der virbereete bereeter HMP2-HRP Léisung.
2. Füügt 6 μl vun der Kalibrateuren, onbekannte Proben, Qualitéitskontrollen an all Rouer a Mix gutt.
3. Transfer 100μl vun all Mëschung huet am Schrëtt 2 a entspriechend Mikrolaton no entspriechend
zu virauszesetzen Testkonfiguratioun.
3. Deckt d'Plack mat Platte Seeler an incubate op 37 ° C fir 30 Minutten.
4. Ewechzehuelen d'Placke Sealer a wäscht d'Plack mat ongeféier 300 μl vun 1 μl Wash vun der Wäschlungsofléiser 4 Mol.
5. Tippen op d'Plack op Pabeierhandduch fir Reschtflëssegkeet an de Wëllen nom Wäschungen ze läschen.
6
7. Füügt 50 μl Stop Léisung fir all gutt fir d'Reaktioun ze stoppen.
8. Liest den Absorbung am Microplate Lieser op 450 nm bannent 10 Minutten (630nm wéi Accessoire ass
recommandéiert fir méi héich Präzisioun Leeschtung).