SARS-COV-2 neytrallaşdırıcı antikor aşkarlama dəsti (Elisa)
【Prinsip】
SARS-COV-2 Neytrallaşdırıcı antikor aşkarlama dəsti rəqabətqabiliyyətli Elisa metodologiyasına əsaslanır.
Təmizlənmiş reseptor bağlayan domen (RBD), viral sünbül (lər) protein və host hüceyrəsindən protein istifadə
Reseptor ACE2, bu test virus ev sahibini zərərsizləşdirən qarşılıqlı əlaqəni təqlid etmək üçün hazırlanmışdır.
Kalibratorlar, keyfiyyət idarələri və serum və ya plazma nümunələri seyreltilməsində fərdi olaraq qarışıqdır
Kiçik borularda hace2-HRP-nin birləşməsini ehtiva edən bufer. Sonra qarışıqlar köçürülür
immobilizasiya edilmiş rekombinant SARS-COV-2 RBD Fraqment (RBD) olan mikroplate quyuları
inkubasiya. 30 dəqiqəlik inkubasiya zamanı, Calibrators, QC-də RBD xüsusi antikoru və
Nümunələr, quyularda immobilizasiya edilmiş RBD-nin xüsusi bağlanması üçün HACE2-HRP ilə rəqabət aparacaqdır. Ardınca
İnkubasiya, Qolları, HACE2-HRP Conjugate'i çıxarmaq üçün 4 dəfə yuvalar yuyulur. Bir həll
TMB daha sonra otaq temperaturunda 20 dəqiqə əlavə edildi və inkubasiya edilir, nəticədə birinin inkişafı ilə nəticələnir
mavi rəng. Rəngin inkişafı 1n hcl əlavə edilməsi ilə dayandırılır və udma
450 Nm-də spektrofotometrik olaraq ölçülmüşdür. Formalaşan rəngin intensivliyi mütənasibdir
Enzyme'nin miqdarı və eyni şəkildə təhlil olunan standartların miqdarı ilə tərs bir şəkildə əlaqəlidir.
Təqdim olunan kalibratorların, konsentrasiyanın yaranan kalibrləmə əyrisi ilə müqayisə etməklə
Naməlum nümunədə neytrallaşdırıcı antikorlar sonra hesablanır.
【Tələb olunan materiallar】
1. Distillə edilmiş və ya deionized su
2. Həssas pipetlər: 10μl, 100μl, 200μl və 1 ml
3. Birdəfəlik pipet tövsiyələri
4. Mikroplate oxuyucusu 450nm-də udma qabiliyyətini oxumağa qadirdir.
5. udma kağızı
6. Qrafik kağızı
7. Vortex qarışdırıcı və ya ekvivalenti
【Nümunə toplanması və saxlanması】
1. K2-EDTA ehtiva edən borularda toplanan serum və plazma nümunələri bu dəst üçün istifadə edilə bilər.
2. Nümunələr vurulmalıdır və suallardan əvvəl 2 ° C-də 48 saata qədər 48 saata qədər saxlanıla bilər.
Daha uzun müddətə (6 aya qədər) təşkil edilən nümunələr, ASSAY-dan əvvəl -20 ° C-də -20 ° C-də dondurulmalıdır.
Təkrar dondurucu tkanslardan çəkinin.
Protokol
【Reagent hazırlığı】
1. Bütün reagentlər soyuducudan götürülməlidir və istifadə etməzdən əvvəl otaq temperaturuna qayıtmağa icazə verilməlidir
(20 ° - 25 ° C). İstifadənindən dərhal sonra soyuducuda bütün reagentləri xilas edin.
2. Bütün nümunələr və nəzarətlər istifadə etməzdən əvvəl vorteksləşdirilməlidir.
3. HACE2-HRP həll hazırlığı: HACE2-HRP konsentratını 1: 51-də seyreltmə nisbəti seyreltmə nisbəti
Tampon. Məsələn, HRP seyreltmə tamponu ilə 100 mkl HACE2-HRP konsentratını seyreltin
HACE2-HRP həllini edin.
4. 1 × Yuma Həll Hazırlanması: 20 × Yuma məhlulunu bir ilə deionizə edilmiş və ya distillə edilmiş su ilə seyreltin
Həcm nisbəti 1:19. Məsələn, 20 ml 20 ml, 380 ml deionized və ya
400 ml 1 × yuyucu həll etmək üçün distillə edilmiş su.
【Test proseduru】
1. Ayrı-ayrı borularda hazırlanmış HACE2-HRP həllinin 120 ml-də.
2. 6 mkl kalibrator, naməlum nümunələr, hər boruda keyfiyyət idarələri əlavə edin və yaxşı qarışdırın.
3. Addım 2-də 2-ci addımda uyğun mikroplate quyularına hazırlanan hər bir qarışığın 100 ml köçürülməsi
əvvəlcədən təyin edilmiş test konfiqurasiyasına.
3. Plitəni boşqab möhürləyici ilə örtün və 30 dəqiqə ərzində 37 ° C-də inkubasiya edin.
4. boşqab möhürləyicisini çıxarın və plitəni dörd dəfə təxminən 300 mkl 1 × yuyucu həll yolu ilə yuyun.
5. Kağız dəsmaldakı boşqabdakı boşqabdakı boşqabdakı qalıcı mayesi, yuvalarını yuyunduqdan sonra vurun.
6. Hər bir quyuya 100 mkb TMB həlli əlavə edin və 20 dəqiqə ərzində 20 - 25 ° C-də qaranlıqda boşqabı inkubasiya edin.
7. Reaksiyanı dayandırmaq üçün hər bir quyuya 50 μL dayandırma həllini əlavə edin.
8. Mikroplate oxuyucusunda 5 dəqiqəlik mikroplate oxuyucusunu oxuyun (630nm Aksesuar olduğu kimi)
daha yüksək dəqiqlik üçün tövsiyə olunur).