Kit de detecció d'anticossos neutralitzants per al SARS-CoV-2 de Testsealabs (ELISA)
Descripció breu:
El cassette de prova d'anticossos neutralitzants per al SARS-CoV-2 és un immunoassaig cromatogràfic ràpid. Aquest assaig està dissenyat per a la detecció qualitativa d'anticossos neutralitzants contra la malaltia del coronavirus 2019. Es pot utilitzar amb mostres de sang completa, sèrum o plasma humans. La prova serveix com a ajuda per avaluar els nivells de títols d'anticossos neutralitzants contra el nou coronavirus humà.
 Resultats ràpids: precisió de laboratori en minuts | Precisió de laboratori: fiable i de confiança |
| Prova a qualsevol lloc: no cal visitar el laboratori | Qualitat certificada: 13485, CE, compatible amb Mdsap |
| Simple i optimitzat: fàcil d'utilitzar, sense complicacions | Màxima comoditat: feu les proves còmodament a casa |
【PRINCIPI】
El kit de detecció d'anticossos neutralitzants per al SARS-CoV-2 es basa en la metodologia ELISA competitiva.
Utilitzant el domini d'unió al receptor (RBD) purificat, la proteïna de la proteïna de l'espícula viral (S) i la cèl·lula hoste
receptor ACE2, aquesta prova està dissenyada per imitar la interacció neutralitzant virus-hoste.
Els calibradors, els controls de qualitat i les mostres de sèrum o plasma es barregen bé individualment en dilució.
tampó que conté el conjugat hACE2-HRP alíquotat en tubs petits. A continuació, les mescles es transfereixen a
els pous de microplaca que contenen el fragment RBD (RBD) recombinant del SARS-CoV-2 immobilitzat per a
incubació. Durant la incubació de 30 minuts, l'anticòs específic de RBD als calibradors, QC i
les mostres competiran amb l'hACE2-HRP per la unió específica del RBD immobilitzat als pous. Després
la incubació, els pous es renten 4 vegades per eliminar el conjugat hACE2-HRP no unit. Una solució de
A continuació, s'afegeix TMB i s'incuba durant 20 minuts a temperatura ambient, cosa que provoca el desenvolupament d'un
color blau. El desenvolupament del color s'atura amb l'addició d'HCl 1N i l'absorbància és
mesurat espectrofotomètricament a 450 nm. La intensitat del color format és proporcional a la
quantitat d'enzim present, i està inversament relacionada amb la quantitat d'estàndards analitzats de la mateixa manera.
Mitjançant la comparació amb la corba de calibratge formada pels calibradors proporcionats, la concentració de
A continuació, es calcula els anticossos neutralitzants de la mostra desconeguda.
【MATERIALS NECESSARIS PERÒ NO PROPORCIONATS】
1. Aigua destil·lada o desionitzada
2. Pipetes de precisió: 10 μL, 100 μL, 200 μL i 1 mL
3. Puntes de pipeta d'un sol ús
4. Lector de microplaques capaç de llegir l'absorbància a 450 nm.
5. Paper absorbent
6. Paper mil·limetrat
7. Mesclador vortex o equivalent
【RECOLLIDA I EMMAGATZEMATGE DE MOSTRES】
1. Per a aquest kit es poden utilitzar mostres de sèrum i plasma recollides en tubs que contenen K2-EDTA.
2. Les mostres s'han de tapar i es poden emmagatzemar fins a 48 hores a 2 °C - 8 °C abans de l'anàlisi.
Les mostres conservades durant un període més llarg (fins a 6 mesos) només s'han de congelar una vegada a -20 °C abans de l'assaig.
Eviteu cicles repetits de congelació i descongelació.
PROTOCOL
【Preparació de reactius】
1. Tots els reactius s'han de treure de la nevera i deixar que tornin a temperatura ambient abans d'utilitzar-los.
(20 °C a 25 °C). Guardeu tots els reactius a la nevera immediatament després d'usar-los.
2. Totes les mostres i els controls s'han de vortexar abans d'utilitzar-los.
3. Preparació de la solució hACE2-HRP: Diluïu el concentrat d'hACE2-HRP a una proporció de dilució d'1:51 amb la dilució
Tampon. Per exemple, diluïu 100 μL de concentrat d'hACE2-HRP amb 5,0 mL de tampó de dilució HRP per
fer una solució hACE2-HRP.
4. Preparació de la solució de rentat 1×: Diluïu la solució de rentat 20× amb aigua desionitzada o destil·lada amb una
proporció de volum d'1:19. Per exemple, diluïu 20 mL de solució de rentat 20× amb 380 mL d'aigua desionitzada o
aigua destil·lada per fer 400 mL de solució de rentat 1×.
【Procediment de prova】
1. En tubs separats, alíquoteu 120 μL de la solució hACE2-HRP preparada.
2. Afegiu 6 μL de calibradors, mostres desconegudes i controls de qualitat a cada tub i barregeu-ho bé.
3. Transferiu 100 μL de cada mescla preparada al pas 2 als pous corresponents de la microplaca segons les instruccions
a la configuració de prova predissenyada.
3. Cobriu la placa amb segellador de plaques i incubeu-la a 37 °C durant 30 minuts.
4. Traieu el segellador de plaques i renteu la placa amb aproximadament 300 μL de solució de rentat 1× per pou quatre vegades.
5. Copeu la placa amb paper absorbent per eliminar el líquid residual dels pous després dels passos de rentat.
6. Afegiu 100 μL de solució TMB a cada pou i incubeu la placa a les fosques a 20-25 °C durant 20 minuts.
7. Afegiu 50 μL de solució d'aturada a cada pou per aturar la reacció.
8. Llegiu l'absorbància al lector de microplaques a 450 nm en 10 minuts (630 nm com a accessori)
recomanat per a un rendiment de major precisió).