Testsealabs Kit për Zbulimin e Antitrupave Neutralizues të SARS-CoV-2 (ELISA)
【PARIMI】
Kiti i Zbulimit të Antitrupave Neutralizues të SARS-CoV-2 bazohet në metodologjinë konkurruese ELISA.
Duke përdorur domenin e pastër të lidhjes së receptorit (RBD), proteinën nga proteina e majës virale (S) dhe qelizën pritëse
receptori ACE2, ky test është projektuar për të imituar bashkëveprimin neutralizues virus-pritës.
Kalibratorët, Kontrollet e Cilësisë dhe mostrat e serumit ose plazmës përzihen mirë individualisht në hollim.
tampon që përmban konjugat hACE2-HRP të ndarë në tuba të vegjël. Pastaj përzierjet transferohen në
puset e mikropllakës që përmbajnë fragmentin e imobilizuar të rekombinuar të SARS-CoV-2 RBD (RBD) për
inkubacioni. Gjatë inkubacionit 30-minutësh, antitrupi specifik RBD në kalibratorë, QC dhe
Mostrat do të konkurrojnë me hACE2-HRP për lidhjen specifike që RBD imobilizoi në puseta.
inkubacionit, pusetat lahen 4 herë për të hequr konjugatin e palidhur hACE2-HRP. Një tretësirë e
Pastaj shtohet TMB dhe inkubohet për 20 minuta në temperaturë ambienti, duke rezultuar në zhvillimin e një
ngjyrë blu. Zhvillimi i ngjyrës ndalet me shtimin e 1N HCl, dhe thithja është
matur spektrofotometrikisht në 450 nm. Intensiteti i ngjyrës së formuar është proporcional me
sasia e enzimës së pranishme dhe është në përpjesëtim të zhdrejtë me sasinë e standardeve të analizuara në të njëjtën mënyrë.
Nëpërmjet krahasimit me kurbën e kalibrimit të formuar nga kalibratorët e dhënë, përqendrimi i
Pastaj llogariten antitrupat neutralizues në mostrën e panjohur.


【MATERIALE TË KËRKUARA, POR TË NUK OFROHEN】
1. Ujë i distiluar ose i deionizuar
2. Pipeta precize: 10μL, 100μL, 200μL dhe 1 mL
3. Maja pipetash të disponueshme
4. Lexues mikropllakash i aftë të lexojë absorbimin në 450 nm.
5. Letër thithëse
6. Letër grafike
7. Përzierës Vortex ose ekuivalent
【MBLEDHJA DHE RUAJTJA E MOSTRËS】
1. Mostrat e serumit dhe plazmës të mbledhura në tuba që përmbajnë K2-EDTA mund të përdoren për këtë kit.
2. Mostrat duhet të mbulohen me kapak dhe mund të ruhen deri në 48 orë në 2 °C - 8 °C para analizës.
Mostrat e mbajtura për një kohë më të gjatë (deri në 6 muaj) duhet të ngrihen vetëm një herë në -20 °C para analizës.
Shmangni ciklet e përsëritura të ngrirjes-shkrirjes.
PROTOKOLLI

【Përgatitja e reagentit】
1. Të gjithë reagentët duhet të nxirren nga frigoriferi dhe të lihen të kthehen në temperaturën e dhomës para përdorimit.
(20° deri në 25°C). Ruajini të gjithë reagentët në frigorifer menjëherë pas përdorimit.
2. Të gjitha mostrat dhe kontrollet duhet të përzihen në vorteks para përdorimit.
3. Përgatitja e tretësirës hACE2-HRP: Holloni koncentratin hACE2-HRP në raportin e hollimit 1:51 me hollim
Tampon. Për shembull, holloni 100 μL të koncentratit hACE2-HRP me 5.0 mL të Tamponit të Hollimit HRP për të
bëni një tretësirë hACE2-HRP.
4. Përgatitja e Tretjes Larëse 1×: Holloni Tretjen Larëse 20× me ujë të dejonizuar ose të distiluar me një
raporti i vëllimit prej 1:19. Për shembull, holloni 20 mL të tretësirës larëse 20× me 380 mL të deionizuar ose
ujë të distiluar për të përgatitur 400 mL tretësirë larëse 1×.
【Procedura e Testimit】
1. Në tuba të veçantë, shpërndani 120 μL të tretësirës së përgatitur hACE2-HRP.
2. Shtoni 6 μL kalibratorë, mostra të panjohura, kontrolle cilësie në secilën tub dhe përzieni mirë.
3. Transferoni 100 μL të secilës përzierje të përgatitur në hapin 2 në puset përkatëse të mikropllakës sipas
në konfigurimin e paracaktuar të testimit.
3. Mbulojeni pllakën me Plate Sealer dhe inkubojeni në 37°C për 30 minuta.
4. Hiqeni vulosësin e pllakës dhe lajeni pllakën me afërsisht 300 μL 1× tretësirë larëse për çdo pus katër herë.
5. Trokitni pllakën mbi peshqir letre për të hequr lëngun e mbetur në puseta pas hapave të larjes.
6. Shtoni 100 μL tretësirë TMB në secilën puset dhe inkuboni pllakën në errësirë në 20-25°C për 20 minuta.
7. Shtoni 50 μL të Tretësirës Stop në secilën puset për të ndaluar reaksionin.
8. Lexoni absorbimin në lexuesin e mikropllakës në 450 nm brenda 10 minutave (630 nm si aksesor është
rekomandohet për performancë me saktësi më të lartë).