Testsealabs SARS-CoV-2 Neutraliserende Teenliggaamopsporingstel (ELISA)
Kort beskrywing:
Die SARS-CoV-2 Neutraliserende Teenliggaam Toetskasset is 'n vinnige chromatografiese immunotoets. Hierdie toets is ontwerp vir die kwalitatiewe opsporing van neutraliserende teenliggaampies teen Coronavirus Siekte 2019. Dit kan gebruik word met menslike volbloed-, serum- of plasmamonsters. Die toets dien as 'n hulpmiddel in die evaluering van die vlakke van menslike anti-nuwe koronavirus neutraliserende teenliggaamtiters.
 Vinnige Resultate: Laboratorium-akkuraat binne minute | Laboratoriumgraad-presisie: Betroubaar en vertrouenswaardig |
| Toets enige plek: Geen laboratoriumbesoek nodig nie | Gesertifiseerde kwaliteit: 13485, CE, Mdsap-voldoening |
| Eenvoudig en gestroomlyn: Maklik om te gebruik, geen moeite nie | Ultieme Gerief: Toets Gerieflik Tuis |
【BEGINSEL】
Die SARS-CoV-2 Neutraliserende Teenliggaamopsporingstel is gebaseer op mededingende ELISA-metodologie.
Deur gebruik te maak van gesuiwerde reseptorbindingsdomein (RBD), proteïen van die virale spyker (S) proteïen en die gasheersel
reseptor ACE2, hierdie toets is ontwerp om die virus-gasheer-neutraliserende interaksie na te boots.
Kalibrators, kwaliteitskontroles en serum- of plasmamonsters word individueel goed gemeng in verdunning.
buffer wat hACE2-HRP-konjugaat bevat, verdeel in klein buisies. Dan word die mengsels oorgedra in
die mikroplaatputjies wat die geïmmobiliseerde rekombinante SARS-CoV-2 RBD-fragment (RBD) bevat vir
inkubasie. Gedurende die 30-minuut inkubasie, die RBD-spesifieke teenliggaam in die kalibrators, QC en
monsters sal met die hACE2-HRP meeding vir spesifieke binding aan die RBD wat in die putjies geïmmobiliseer is. Daarna
Tydens die inkubasie word die putjies 4 keer gewas om ongebonde hACE2-HRP-konjugaat te verwyder. 'n Oplossing van
TMB word dan bygevoeg en vir 20 minute by kamertemperatuur geïnkubeer, wat lei tot die ontwikkeling van 'n
blou kleur. Die kleurontwikkeling word gestop met die byvoeging van 1N HCl, en die absorbansie is
spektrofotometries gemeet teen 450 nm. Die intensiteit van die gevormde kleur is eweredig aan die
hoeveelheid ensiem teenwoordig, en is omgekeerd verhouding tot die hoeveelheid standaarde wat op dieselfde manier getoets word.
Deur vergelyking met die kalibrasiekurwe wat deur die voorsiene kalibrators gevorm word, word die konsentrasie van
neutraliserende teenliggaampies in die onbekende monster word dan bereken.
【MATERIAAL VEREIS, MAAR NIE VOORSIEN NIE】
1. Gedistilleerde of gedeïoniseerde water
2. Presisie-pipette: 10 μL, 100 μL, 200 μL en 1 mL
3. Weggooibare pipetpunte
4. Mikroplaatleser wat absorpsie teen 450 nm kan lees.
5. Absorberende papier
6. Grafiekpapier
7. Vortexmenger of ekwivalent
【MONSTERVERSAMELING EN BERGING】
1. Serum- en plasmamonsters wat in buise wat K2-EDTA bevat, versamel is, kan vir hierdie stel gebruik word.
2. Monsters moet toegemaak word en kan vir tot 48 uur by 2 °C - 8 °C gestoor word voor die toetsing.
Monsters wat vir 'n langer tydperk (tot 6 maande) gehou word, moet slegs een keer by -20 °C gevries word voor die toets.
Vermy herhaalde vries-ontdooi siklusse.
PROTOKOL
【Reagensvoorbereiding】
1. Alle reagense moet uit die yskas gehaal word en toegelaat word om kamertemperatuur te bereik voor gebruik.
(20° tot 25°C). Bêre alle reagense onmiddellik na gebruik in die yskas.
2. Alle monsters en kontroles moet voor gebruik gevortex word.
3. Voorbereiding van hACE2-HRP-oplossing: Verdun hACE2-HRP-konsentraat teen 'n verdunningsverhouding van 1:51 met Verdunning
Buffer. Verdun byvoorbeeld 100 μL hACE2-HRP-konsentraat met 5.0 ml HRP-verdunningsbuffer tot
maak 'n hACE2-HRP-oplossing.
4. Voorbereiding van 1× Wasoplossing: Verdun die 20× Wasoplossing met gedeïoniseerde of gedistilleerde water met 'n
volumeverhouding van 1:19. Verdun byvoorbeeld 20 ml van 20× Wasoplossing met 380 ml gedeïoniseerde of
gedistilleerde water om 400 ml van 1× Wasoplossing te maak.
【Toetsprosedure】
1. Verdeel 120 μL van die voorbereide hACE2-HRP-oplossing in aparte buise.
2. Voeg 6 μL kalibrators, onbekende monsters, kwaliteitskontroles in elke buis by en meng goed.
3. Dra 100 μL van elke mengsel wat in stap 2 voorberei is, oor na ooreenstemmende mikroplaatputjies volgens
tot voorafontwerpte toetskonfigurasie.
3. Bedek die plaat met Plate Sealer en inkubeer by 37°C vir 30 minute.
4. Verwyder die plaatverseëlaar en was die plaat vier keer met ongeveer 300 μL van 1× wasoplossing per putjie.
5. Tik die plaat teen 'n papierhanddoek om oorblywende vloeistof in die putjies na die wasstappe te verwyder.
6. Voeg 100 μL TMB-oplossing by elke putjie en inkubeer die plaat in die donker by 20 - 25°C vir 20 minute.
7. Voeg 50 μL Stopoplossing by elke putjie om die reaksie te stop.
8. Lees die absorbansie in mikroplaatleser teen 450 nm binne 10 minute (630 nm as bykomstigheid is
aanbeveel vir hoër presisie-prestasie).