SARS-COV-2 NEUBODY KIT DI SINDICITÀ (Elisa)
【Principiu】
U kit di rilevazione di i saccheri di u sacricuzione di u sacru hè basatu nantu à a metodulugia di elisa competitiva.
Aduprendu Dominiu Pacificatu di u cuntaptore (RBD), Proteina da a Proteina Vertali è a Cellula Host
U receptore Ace2, sta prova hè pensata per immersione l'interazzione neutralizazione di u virus.
Calibratori, cuntrolli di qualità, è a serum o mostri di plasma sò mischjati individuali in diluzione
buffer chì cuntene Hace2-HRP cunjutata aliquoted in picculi tubi. Allora i mischji sò trasferiti in
I pozzi microplati chì cuntenenu immobilizzati recombinanti RBAb-2 RBD frammentale (RBD) per
incubazione. Durante l'incubazione di 30 minuti, l'antibody specificu RBD in i Calibratori, QC è
I campioni cumpeteranu cù l'Hace2-HRP per u ramu specificu u RBD immobilizzatu in i pozzi. Dopu
L'incugazione, i pozzi sò lavati 4 volte per caccià cunjugate senza fustu di un rimarcatu. Una suluzione di
TMB hè dopu aghjuntu è incubatu per 20 minuti à a temperatura ambienti, risultatu in u sviluppu di a
culore blu. U sviluppu di u culore hè paratu cù l'aghjuntu di 1n hcl, è l'absorbance hè
misuratu spettrofotometricamente à 450 nm. L'intensità di u culore furmatu hè proporzionale à u
Quantità di enzima prisente, è hè inversamente ligata à a quantità di standard chì si assandanu in u stessu modu.
À traversu u paragone cù a curva di a calibrazione furmata da i calibratori furniti, a cuncentrazione di
I antibodii neutralizzati in u sample scunnisciutu hè tandu calculatu.
【Materiali necessarii ma micca furniti】
1. Sbuchjata o deionizata
2. Pipette precisione: 10 μl, 100 μl, 200 μl è 1 ml
3. Cunsiglii di pipette dispunibili
4. U lettore microflu capace di leghje l'assorbenza à 450nm.
5. Carta assorbente
6. carta grafica
7. Vortice mischju o equivalente
【Cullizzioni è almacenamentu specimen】
1. I mostri di serum è di plasma anu riunitu in i tubi chì cuntenenu k2-edta pò esse usatu per questu kit.
2. E specimens deve esse capulatu è ponu esse guardati finu à 48 ore à 2 ° C - 8 ° C prima di asswaysing.
Specimens tinuti per un tempu più longu (finu à 6 mesi) deve esse congelatu una sola volta à -20 ° C PRIMA DI L'AFFERTA.
Evitate i cicli di creme ripetuta.
U protocolu
【Preparazione reagente】
1. Tutti i reagenti anu da esse cacciati da u frigorifero è permessu di vultà à a temperatura di l'ambienti prima di l'usu
(20 ° à 25 ° C). Salvà tutti i reagenti in frigorifero subitu dopu l'usu.
2. Tutti i mostri è i cuntrolli anu da esse vortice prima di l'usu.
3. A preparazione di soluzione Hace2-HRP: Dilute Hace2-Hr Concentrate à 1: 51 Ratio di Diluction cun Diluzione
Buffer. Per esempiu, dilute 100 μL di HACE2-HRT2-HRP CONCENTRATU CON 5.0ML di BUFFER DI Diluzione HRP
fà una soluzione Hace2-HRP.
4. 1 × Lavurita di suluzione preparazione: Dilute a suluzione di u 20 × Wash cun acqua deionizata o distillata cù un
Ratio di u Volume di 1:19. Per esempiu, dilute 20 ml di 20 × Lavu di lavà cù 380 ml di Deionized o
acqua distillata per fà 400 ml di 1 × Lada di Lavatu.
【Procedura di prova】
1. In i tubi separati, aliquot 120 μl di a suluzione di Hace2-HRP preparatu.
2. Aggiungi 6 μL di Calibratori, mostri scunnisciuti, cuntrolli di qualità in ogni tubu è mischjà bè.
3. Trasferitu 100 μl di ogni mischju preparatu in u passu 2 in i beni microplati currispondenti sicondu
per predicà a cunfigurazione di prova.
3. Coperta u piattu cù u sealer di u piattu è incubate à 37 ° C per 30 minuti.
4. Sguassà u pattu è lavà u platu cù circa 300 μl di 1 × Lavurazione di Wash per Wellfor quattru volte.
5. Toccate a placa nantu à u tovagliolu di carta per caccià u liquidu residuale in i pozzi dopu à i passi di lavà.
6. Aggiungi 100 μL di suluzione TMB à ogni pozzu è incubà u platu in u bughju à 20 - 25 ° C per 20 minuti.
7. Aggiungi 50 μL di suluzione di stop à ogni bè per piantà a reazione.
8. Leghjite l'absorbance in u lettore microflu in 450 nm in 10 minuti (630nm cum'è accessori hè
cunsigliatu per u rendimentu di precisione più altu).