Kit di rilevazione di anticorpi neutralizzanti per u SARS-CoV-2 di Testsealabs (ELISA)
【PRINCIPIU】
U Kit di Detezione di Anticorpi Neutralizzanti SARS-CoV-2 hè basatu annantu à a metodologia ELISA cumpetitiva.
Utilizendu u duminiu di legame di u receptore purificatu (RBD), a proteina da a proteina di a punta virale (S) è a cellula ospitante
receptore ACE2, stu test hè cuncipitu per imità l'interazione neutralizante virus-ospite.
I calibratori, i cuntrolli di qualità è i campioni di serumu o plasma sò mischiati individualmente bè in diluzione.
buffer chì cuntene u cunjugatu hACE2-HRP aliquotatu in picculi tubi. Dopu, e miscele sò trasferite in
i pozzetti di micropiastra chì cuntenenu u frammentu RBD (RBD) ricombinante di SARS-CoV-2 immobilizatu per
incubazione. Durante l'incubazione di 30 minuti, l'anticorpu specificu RBD in i calibratori, QC è
I campioni cumpeteranu cù l'hACE2-HRP per u ligame specificu di u RBD immobilizatu in i pozzi. Dopu
l'incubazione, i pozzi sò lavati 4 volte per caccià u cunjugatu hACE2-HRP micca ligatu. Una suluzione di
TMB hè tandu aghjuntu è incubatu per 20 minuti à temperatura ambiente, risultendu in u sviluppu di un
culore turchinu. U sviluppu di u culore hè firmatu cù l'aghjunta di HCl 1N, è l'assorbanza hè
misuratu spettrofotometricamente à 450 nm. L'intensità di u culore furmatu hè proporzionale à u
quantità d'enzima presente, è hè inversamente ligata à a quantità di standard analizzati in u listessu modu.
Per via di a paragunazione cù a curva di calibrazione furmata da i calibratori furniti, a cuncentrazione di
L'anticorpi neutralizzanti in u campione scunnisciutu sò tandu calculati.


【MATERIALI RICHIESTI MA NON FORNITI】
1. Acqua distillata o deionizzata
2. Pipette di precisione: 10 μL, 100 μL, 200 μL è 1 mL
3. Punte di pipetta monouso
4. Lettore di micropiastre capace di leghje l'assorbanza à 450 nm.
5. Carta assorbente
6. Carta millimetrata
7. Miscelatore Vortex o equivalente
【RACCOLTA È CONSERVAZIONE DI CAMPIONI】
1. I campioni di serumu è di plasma raccolti in tubi chì cuntenenu K2-EDTA ponu esse aduprati per questu kit.
2. I campioni devenu esse tappati è ponu esse cunservati finu à 48 ore à 2 °C - 8 °C prima di l'analisi.
I campioni cunservati per un periodu più longu (finu à 6 mesi) devenu esse congelati solu una volta à -20 °C prima di l'analisi.
Evitate cicli ripetuti di congelazione-scongelazione.
PROTOCOLU

【Preparazione di Reagenti】
1. Tutti i reagenti devenu esse cacciati da a refrigerazione è lasciati vultà à temperatura ambiente prima di l'usu.
(20° à 25°C). Conservate tutti i reagenti in u frigorifero subitu dopu l'usu.
2. Tutti i campioni è i cuntrolli devenu esse vortexati prima di l'usu.
3. Preparazione di a suluzione hACE2-HRP: Diluite u concentratu hACE2-HRP à un rapportu di diluzione 1:51 cù a Diluzione
Tampone. Per esempiu, diluite 100 μL di concentratu hACE2-HRP cù 5,0 mL di tampone di diluizione HRP per
fà una suluzione hACE2-HRP.
4. Preparazione di a Soluzione di Lavaggio 1×: Diluite a Soluzione di Lavaggio 20× cù acqua deionizzata o distillata cù un
rapportu di vulume di 1:19. Per esempiu, diluite 20 mL di Soluzione di Lavaggio 20× cù 380 mL di deionizzata o
acqua distillata per fà 400 mL di soluzione di lavaggio 1×.
【Prucedura di prova】
1. In tubi separati, aliquotate 120 μL di a Soluzione hACE2-HRP preparata.
2. Aghjunghjite 6 μL di calibratori, campioni scunnisciuti, cuntrolli di qualità in ogni tubu è mischiate bè.
3. Trasferisce 100 μL di ogni mistura preparata in u passu 2 in i pozzetti di micropiastra currispondenti secondu
à a cunfigurazione di prova predefinita.
3. Copre a piastra cù u sigillante per piastre è incuba à 37 °C per 30 minuti.
4. Eliminate u sigillante di piastra è lavate a piastra cù circa 300 μL di soluzione di lavaggio 1× per pozzetto per quattru volte.
5. Picchiettate a piastra nantu à una toalla di carta per caccià u liquidu residuale in i pozzetti dopu i passi di lavaggio.
6. Aghjunghje 100 μL di suluzione TMB à ogni pozzettu è incubate a piastra à u bughju à 20-25 °C per 20 minuti.
7. Aghjunghje 50 μL di Soluzione di Stop à ogni pozzettu per fermà a reazione.
8. Leghje l'assorbanza in u lettore di micropiastre à 450 nm in 10 minuti (630 nm cum'è accessoriu hè
cunsigliatu per prestazioni di precisione più elevate).