SARS-COV-2 бейтараптандыратын антиденді Антидене жинақ жиынтығы (ELISA)
【Қағида】
SARS-COV-2 бейтараптандыратын антиденені анықтайтын жинақ конкурстық элиза әдіснамасына негізделген.
Тазартылған рецепторларды байланыстырушы доменді (RBD), ақуызды вирустық желім (дар) ақуызы және хост ұяшығынан
Requeptor ACE2, бұл тест вирус қожайынды бейтараптандыратын өзара әрекеттесуді еліктеуге арналған.
Калибраторлар, сапаны бақылау және сарысу немесе плазмалық үлгілер жеке сұйылту кезінде жақсы араласады
Hace2-Hrp Conjugate кішкентай түтіктерде орналасқан буфер. Содан кейін қоспалар ауыстырылады
Құрамында иммобилизацияланған рекомбинантты SASS-2 RBD фрагменттері бар микроклат ұңғымалары (RBD)
инкубация. 30 минуттық инкубация кезінде Калибраторларда, QC және
Үлгілер ұңғымаларда иммобилизацияланған RBD-ді нақты байланыстыру үшін HECE2-HRP-мен бәсекеге түседі. Кейін
Инкубация, ұңғымалар Hace2-HRP конъюгациясын жою үшін 4 рет жуылады. Шешімі
Содан кейін TMB қосылады және бөлме температурасында 20 минут инкубацияланады, нәтижесінде а
көк түс. Түстердің дамуы 1-ші HCL қосу және сіңірумен тоқтатылады
Өлшенген спектрофотометриялық түрде 450 нм. Түстердің қарқындылығы пропорционалды
Фермент мөлшері ұсынылған және стандарттардың бірдей мөлшерімен байланысты.
Ұсынылған калибраторлар құрған калибрлеу қисығымен салыстыру арқылы шоғырлануы
Содан кейін белгісіз үлгіні бейтараптандыратын антиденелер есептеледі.
【Қажет, бірақ берілмеген материалдар】
1. Тазартылған немесе иондалған су
2. Дәлдік шомылдар: 10 мкл, 100 мкл, 200 мк және 1 мл
3. Бір рет қолданылатын тамшуыр ұштары
4. 450NM-де сіңіруге қабілетті микропелаттық оқу құралы.
5. Сіңіретін қағаз
6. Графикалық қағаз
7. Құйынды араластырғыш немесе балама
【Үлгіні жинау және сақтау】
1. К2-EDTA бар түтіктерде жиналған сарысу және плазмалық үлгілерді осы жинақ үшін пайдалануға болады.
2
Ұзақ уақытқа созылған үлгілер (6 айға дейін) талдау жасамас бұрын -20 ° C-тан -20 ° C-тан кейін бір рет қатып қалуы керек.
Қайталама қатып қалмаңыз.
Хаттама
【Реагентті дайындау】
1. Барлық реагенттерді тоңазытқыштан шығару керек және қолданар алдында бөлме температурасына оралуға рұқсат етілуі керек
(20 ° / 25 ° C). Қолданғаннан кейін барлық реагенттерді тоңазытқышта дереу сақтаңыз.
2. Барлық үлгілер мен басқару элементтері қолданар алдында құштар болуы керек.
3. HEACE2-HRP ерітіндісін дайындау: HACE2-HRP концентратын сұйылту 1: 51 сұйылту арақатынасы
Буфер. Мысалы, 100 мкл Hace2-Hrp концентратын 5,0мл HRP сұйылту буферімен сұйылтыңыз
Hace2-Hrp ерітіндісін жасаңыз.
4. 1 × жуу ерітіндісін дайындау: 20 × жуу ерітіндісін иондалған немесе тазартылған сумен сұйылтыңыз
Көлем қатынасы 1:19 коэффициенті. Мысалы, 380 мл ионизацияланған 20 мл 20 мл жуу ерітіндісін сұйылтыңыз
тазартылған су 400 мл 1 × жуу ерітіндісін құрайды.
【Тест процедурасы】
1
2. 6 мкл калибратор, белгісіз үлгілер, әр түтікте сапаны бақылау және жақсылап араластырыңыз.
3. 2-қадамда дайындалған 100 мкл әр қоспаны сәйкес микроплат ұңғымаларына сәйкес жеткізіңіз
Сынақ конфигурациясы үшін.
3. Пластинаны тақтайшамен жабыңыз және 30 минут ішінде 37 ° C температурада жабыңыз.
4. Пластиналық тығыздағышты алыңыз да, табақты төрт рет шамамен 300 мкл 1 × жуу шипірсімен жуыңыз.
5. Қадамдарды жуғаннан кейін ұңғымалардағы қалдық сұйықтықты алып тастау үшін, қағаз сүлгімен тақтаны түртіңіз.
6
7. Әр ұңғымаға 50 мкл тоқтау шешімін қосыңыз.
8. Микротехникалық оқу құралындағы сіңіргішті 10 минут ішінде 450 нм-де оқыңыз (630nm аксессуар ретінде)
жоғары дәлдікке ұсынылады).